利用基因打靶技術構建結核分支桿菌Rv0901基因缺失株的研究.pdf

1、結核病是由結核桿菌引起的一種傳染病,結核桿菌由于其獨特的致病和流行傳播方式,加之近年來多耐藥性結核桿菌的產生以及結核桿菌與人類免疫缺陷癥病毒(HIV)的交叉伴發(fā)感染等原因使結核病的流行再度呈現上升趨勢,全球結核病的防治工作形勢嚴峻.目前世界上許多國家都加大了對結核病的防治力度,嚴格執(zhí)行直接面視下的短程化學療法(簡稱DOTS),同時也積極開展結核病的基礎和臨床科研工作,探索預防和治療結核病的新方法,以便更有效地控制結核病.自1921年以來

2、,BCG就一直廣泛應用于結核病的預防接種,目前在全球已接種超過了30億人次,大量研究表明BCG對兒童原發(fā)型結核病具有較好的預防作用,但對作為結核病主要流行和傳播形式的成人結核病,BCG預防效果較差.由于目前對結核桿菌毒力基因了解仍舊有限,距離安全闡明結核桿菌毒力基因,尤其是與其侵襲力、生活力及抗藥性產生密切相關的一些重要基因的功能還有相當的距離.Rv0901基因編碼的蛋白是尚未確定其生物特征和功能的假想蛋白,屬于結核桿菌特異性蛋白成分,

3、位于結核桿菌胞膜表現,呈表面暴露或屬分泌蛋白物質.其疏水性N末端與麻風桿菌毒素蛋白TR03307相似,我們推想它可能是結核桿菌毒力相關基因.為驗證這一推想,該研究采用基因打靶技術構建了結核桿菌Rv0901基因缺失株以用于進一步通過動物實驗研究其毒力和功能.首先構建用于基因打靶的特異性傳遞載體,該載體包含用于同源重組的缺失靶基因序列和篩選標記,然后用電穿孔法將自殺質粒pRKS10轉入結核桿菌標準毒力株H37Rv中,篩選獲得結核桿菌Rv09