山羊半月板脫細胞基質支架的制備及擴大孔徑方法的研究.pdf

1、半月板對于維持膝關節(jié)的生理功能是很重要的，半月板損傷與膝關節(jié)骨關節(jié)炎(OA)的發(fā)生密切相關。由于半月板的自我修復能力有限，半月板部分或全部切除是治療半月板損傷的常用手段。隨著醫(yī)學的發(fā)展，組織工程對損傷半月板缺損的再生修復帶來了希望，而找尋合適的半月板支架在半月板組織工程中起著至關重要的作用。脫細胞半月板支架不僅具有良好的三維結構、生物相容性和生物力學性能。本文旨在研究山羊半月板脫細胞基質支架的制備方法、觀察它們的形態(tài)結構、測定其生物力學

2、性能，并且進一步研究擴大支架孔徑地方法，為構建組織工程半月板研究打下基礎。
　　方法:
　　取淘汰山羊半月板，采用不同脫細胞方法進行山羊半月板脫細胞基質支架的制備。方法一:采用高滲-低滲反復凍融、Tris-HCl溶液聯(lián)合胰蛋白酶溶液進行半月板基質的脫細胞處理;方法二:用高滲-低滲反復凍融、雙氧水和胰蛋白酶溶液輪流浸泡后，再用化學去垢劑TrionⅩ-100溶液和脫氧膽酸鈉溶液交替使用進行半月板基質的脫細胞處理。組織學觀察:用H

3、E染色、天狼猩紅染色、甲苯胺藍染色、番紅O染色和番紅-固綠染色方法對兩種不同方法制備的脫細胞基質進行組織學檢測，并將無細胞殘留組與天然半月板進行掃描電鏡觀察和生物力學測定。最后分別用甲酸、Ⅰ型膠原酶、胰蛋白酶+Ⅰ型膠原酶對制備好的山羊半月板脫細胞基質支架用進行處理，在掃描電鏡下觀察并進行生物力學測定。
　　結果:
　　方法一制備的脫細胞支架組織學觀察有細胞殘留，方法二制備的脫細胞支架組織學檢測無任何細胞殘留，基質中保存了大量

4、的膠原纖維。掃描電鏡結果顯示脫細胞支架組的孔徑和孔隙率比天然半月板略大，生物力學性能上二者無顯著性差異。擴大孔徑研究結果顯示:甲酸組、Ⅰ型膠原酶組和胰蛋白酶+Ⅰ型膠原酶組的孔徑和孔隙率較脫細胞基質支架的大，生物力學測定顯示甲酸組、Ⅰ型膠原酶組和胰蛋白酶+Ⅰ型膠原酶組與脫細胞基質支架組均存在顯著性差異。
　　結論:
　　1.用蒸餾水-10％NaCl溶液反復凍融、0.1％雙氧水和0.5％的胰蛋白酶輪流浸泡后，再用化學去垢劑Tri