針灸對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)Aβ內(nèi)化相關(guān)蛋白酶的影響研究.pdf

1、目的：老年斑是阿爾茨海默病特征性病理改變之一，β淀粉樣蛋白是老年斑的核心物質(zhì)，因此減少Aβ的過(guò)量生成或加速其內(nèi)化，減少Aβ的聚集、沉降，是改善阿爾茨海默病病理進(jìn)程的重要途徑之一。根據(jù)目前已經(jīng)發(fā)表的研究文獻(xiàn)，有關(guān)Aβ的生成途徑方面的研究已有了一定深度的探索，而有關(guān)Aβ內(nèi)化方面的研究還需要更進(jìn)一步的深入。本課題從Aβ降解的方面進(jìn)行研究，選取脂蛋白酯酶、抗凝乳蛋白酶α、載脂蛋白E作為研究指標(biāo)，通過(guò)觀察針灸百會(huì)和腎俞穴對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活，及此

2、三種蛋白酶與Aβ關(guān)系，探討“益腎調(diào)督”針灸法治療阿爾茨海默病的可能作用機(jī)制。方法：選用Wistar大鼠、SPF級(jí)、雄性、體重（360±20）g，造模前所有大鼠經(jīng)Morris水迷宮篩選，將符合條件的60只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、治療組。模型組用微量注射法向雙側(cè)海馬區(qū)各注射5μL寡聚態(tài)Aβ1-42；假手術(shù)組用同樣方法在雙側(cè)海馬區(qū)注射與Aβ1-42等量的生理鹽水；治療組在造模成功的基礎(chǔ)上選取百會(huì)穴和腎俞穴進(jìn)行常規(guī)針刺

3、（針具規(guī)格：長(zhǎng)25mm直徑0.35mm毫針），選用細(xì)艾條（半徑約0.25mm）在大鼠腧穴上方2～3cm處進(jìn)行溫和灸，每穴15min；正常組不做任何處理，常規(guī)飼養(yǎng)。每日1次，6天為1個(gè)療程，共2個(gè)療程，療程間休息1日。針灸治療結(jié)束后，各組選取10只進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)：（1）采用Morris水迷宮檢測(cè)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力；（2）采用ELISA法檢測(cè)血清中Aβ1-42的含量；（3）采用免疫組化法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)GFAP蛋白的表達(dá)水平；（4）采用West

4、ern-Blot法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)GFAP和Aβ內(nèi)化相關(guān)蛋白酶ACT、LPL、ApoE的表達(dá)。
　　結(jié)果：兩個(gè)療程治療結(jié)束后，
　?。?）行為學(xué)觀察：與模型組相比，治療組大鼠跨越平臺(tái)數(shù)增加（P<0.01），而逃避潛伏期則縮短（P<0.01）。
　?。?）ELISA檢測(cè)結(jié)果：與正常組相比，模型組Aβ1-42明顯升高（P<0.01），假手術(shù)組Aβ1-42未有明顯差異（P＞0.05）；與模型組相比，治療組Aβ1-42明顯降低（

5、P<0.05）。
　　（3）免疫組化結(jié)果：和正常組相比，模型組GFAP表達(dá)升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）；和模型組相比，治療組平均光密度值沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）；和正常組比較，治療組GFAP平均光密度值具有顯著差異（P＜0.05）。（4）Western-Blot檢測(cè)結(jié)果：與正常組相比，模型組GFAP蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），假手術(shù)組GFAP表達(dá)則未有明顯差異（P＞0.05）；與模型組相比，治療組GFAP表達(dá)稍降

6、低，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與正常組相比，模型組LPL、ApoE蛋白表達(dá)顯著降低（P<0.01），ACT表達(dá)顯著升高（P<0.01），假手術(shù)組LPL、ApoE、ACT表達(dá)則未有明顯差異（P＞0.05）；與模型組比較，治療組LPL、ApoE表達(dá)顯著升高（P<0.05），ACT表達(dá)顯著降低（P<0.05）。
　　結(jié)論：“益腎調(diào)督”針灸法可以通過(guò)上調(diào)大鼠海馬區(qū)LPL和ApoE的表達(dá)，下調(diào)ACT的含量，促進(jìn)Aβ的內(nèi)化，減少β淀粉樣蛋