冠心病發(fā)病機(jī)制的代謝組學(xué)初步探索及優(yōu)化冠心病介入治療的臨床研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述:
　　第一部分 （一）基于UHPLC-QTOF/MS的冠心病非靶向代謝組學(xué)分析及代謝標(biāo)志物的探索
　　目的:不同人群受到不同遺傳因素和環(huán)境危險(xiǎn)因素相互作用后將最終影響共同的生物代謝過(guò)程，因此通過(guò)代謝組學(xué)手段從小分子代謝物水平的變化研究冠心病動(dòng)脈粥樣硬化的病理形成機(jī)制已成為新的研究方向。本研究旨在通過(guò)非靶向代謝組學(xué)方法探索中國(guó)冠心病患者群體的血漿小分子代謝特點(diǎn)及其與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　

2、　方法:經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的冠脈造影資料審查，從中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院國(guó)家心血管病中心阜外心血管病醫(yī)院的795位通過(guò)篩選的患者中抽取300位患者建立了一個(gè)獨(dú)立的代謝組學(xué)研究隊(duì)列:150人嚴(yán)重冠脈狹窄的冠心病患者組(severe coronary heart disease，sCHD)和年齡與性別1∶1匹配的150人冠脈造影正常對(duì)照組(angiographically normalcontrols，ANC)。我們將冠狀動(dòng)脈造影顯示至少一支主支冠狀動(dòng)脈管腔直

3、徑縮窄≥80％定義為sCHD組，將經(jīng)冠脈造影確認(rèn)冠狀動(dòng)脈管腔直徑縮窄≤20％定義為ANC組。抽取患者的靜脈血分離血漿，運(yùn)用超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用(UHPLC-QTOF/MS)的代謝組學(xué)檢測(cè)方法，從陽(yáng)離子相和陰離子相兩種電離模式進(jìn)行了血漿代謝組學(xué)分析。將篩選出的具有明確二級(jí)質(zhì)譜定性信息的小分子代謝物分別加入多元線性回歸模型(P＜0.05），分析校正傳統(tǒng)冠心病危險(xiǎn)因素（年齡、性別、體重指數(shù)、糖尿病、高血壓、高脂血癥、冠心病家族史、

4、吸煙史）和檢測(cè)批次等因素。為了防止n次檢驗(yàn)可能帶來(lái)的Ⅰ類錯(cuò)誤，又進(jìn)行了Bonferroni correction校正(P＜8.2×10-5(0.05/611))，并使用logistic回歸模型分析了這些小分子代謝物與冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)的方向和程度。
　　結(jié)果:除年齡和性別進(jìn)行了匹配，冠心病傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素在嚴(yán)重冠脈狹窄的冠心病患者組皆顯著高于冠脈造影正常對(duì)照組。300個(gè)血漿樣本上機(jī)檢測(cè)后我們一共獲得611個(gè)(466個(gè)陽(yáng)離子模式、145

5、個(gè)陰離子模式)具有明確定性半定量信息的有效峰，多元線性回歸分析(P＜0.05)校正傳統(tǒng)冠心病危險(xiǎn)因素和檢測(cè)批次后我們一共篩選出105個(gè)差異代謝物（其中21個(gè)實(shí)為未知代謝物）在兩組間血漿水平具有顯著性差異:主要包含51種磷脂、10種肉毒堿、8種游離脂肪酸類、5種膽汁酸代謝中間產(chǎn)物、3種氨基酸和7種未統(tǒng)一分類代謝物（吲哚、己酮酸、4-吡哆酸、水楊尿酸、咖啡因、睪酮、對(duì)甲氧基苯乙酸）。經(jīng)Bonferroni correction校正(P＜8.

6、2×10-5(0.05/611))從105種差異代謝物中篩選出了6種組間差異最為顯著的血漿代謝物(吡哆酸、棕櫚酸、亞油酸、脂酰肉毒堿(14∶1)、石膽酸、磷脂酰甘油(20∶3/2∶0))，且這些代謝物皆表現(xiàn)出與冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)顯著的正相關(guān)(odds ratio，OR值范圍2.79-7.24)。
　　結(jié)論:本研究借助非靶向代謝組學(xué)方法獲得了中國(guó)冠心病患者群體的代謝指紋圖譜，并首次報(bào)道了吡哆酸、石膽酸和磷脂酰甘油(20∶3/2∶0)這三

7、種與冠心病病理生理過(guò)程有強(qiáng)關(guān)聯(lián)的潛在生物標(biāo)志物，為從整體水平探索冠心病動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制及尋求新的治療途徑提供了依據(jù)。
　　第一部分（二）吡哆酸對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及單核巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響
　　目的:我們前期的研究通過(guò)血漿代謝組學(xué)檢測(cè)發(fā)掘了一種在嚴(yán)重冠脈狹窄的冠心病患者組和冠脈造影正常對(duì)照組之間存在顯著性差異的小分子代謝物吡哆酸，并且發(fā)現(xiàn)血漿吡哆酸每增加1％冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)就增加4.879倍。為了進(jìn)一步探討吡哆酸在動(dòng)脈粥樣

8、硬化形成進(jìn)展過(guò)程中的作用，我們?cè)诩?xì)胞水平初步探索了吡哆酸可能對(duì)兩種冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病理形成緊密相關(guān)的細(xì)胞(人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，人單核細(xì)胞系(THP-1))產(chǎn)生的影響。
　　方法:我們先后使用不同刺激濃度(20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L、500 nmol/L、1000 nmol/L、2000 nmol/L)的吡哆酸溶液刺激體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)、人單核

9、細(xì)胞系(THP-1)，于不同刺激時(shí)點(diǎn)(12h、24h、48h和72h)通過(guò)細(xì)胞活力檢測(cè)分析吡哆酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的增殖影響，于吡哆酸刺激48h時(shí)通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction，qRT-PCR)的方法檢測(cè)白介素1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)和細(xì)胞粘附因子(ICAM)的表達(dá)變化以評(píng)估炎癥反應(yīng)變化。
　　結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn)給予吡哆

10、酸刺激48小時(shí)，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖活力開(kāi)始發(fā)生了顯著下降，且隨著吡哆酸濃度增加而逐漸降低，2000 nmol/L濃度刺激時(shí)最低可下降10.7％。給予吡哆酸刺激72小時(shí)，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖活力從刺激濃度20 nmol/L起即表現(xiàn)出增殖活力顯著下降，隨著吡哆酸濃度增加而逐漸降低，1000nmol/L濃度刺激時(shí)最低可下降10.56％。低濃度的吡哆酸刺激沒(méi)有誘發(fā)單核細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，而當(dāng)吡哆酸濃度為1000 nmol/L和2000 nmol/

11、L時(shí)，THP-1細(xì)胞IL-1β、TNF-α和ICAM表達(dá)顯著高于空白對(duì)照組細(xì)胞，IL-1β表達(dá)量最高升高到1.22倍、TNF-α的表達(dá)量最高升高到1.4倍、ICAM的表達(dá)量最高升高到1.74倍。
　　結(jié)論:吡哆酸能夠誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)增殖抑制、人單核細(xì)胞系炎癥因子(IL-1β、TNF-α、ICAM)表達(dá)上調(diào)，因此推測(cè)血漿吡哆酸水平升高與動(dòng)脈粥樣硬化的形成、發(fā)展相關(guān)。
　　第二部分 混合置入藥物洗脫支架和金屬裸支架治療多

12、處病變冠心病患者的遠(yuǎn)期療效和安全性評(píng)價(jià)
　　目的:藥物洗脫支架(DES)有效降低了金屬支架置入后的再狹窄發(fā)生率及靶血管或靶病變的血運(yùn)重建率，但其涂層藥物能夠?qū)е掳醒軆?nèi)皮修復(fù)延遲以及致死性支架內(nèi)血栓形成風(fēng)險(xiǎn)升高，引起了學(xué)界對(duì)DES使用安全性的關(guān)注與探討。因此針對(duì)冠狀動(dòng)脈多處病變患者，術(shù)者們開(kāi)始嘗試藥物洗脫支架和金屬裸支架混合置入Hybrid支架）的介入治療策略，以期通過(guò)適度減少藥物支架置入數(shù)量來(lái)提高PCI治療安全性并獲得最佳的臨床

13、效果。本研究旨在評(píng)估混合置入藥物洗脫支架(Hybrid支架)和金屬裸支架治療多處病變冠心病患者的遠(yuǎn)期療效和安全性。
　　方法:本研究入選了2004年4月至2006年10月期間，在我院行擇期經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)的冠狀動(dòng)脈多處病變患者共計(jì)6495例，并根據(jù)支架置入種類分為藥物洗脫支架和金屬裸支架混合置入組(Hybrid組，848例)和單純藥物洗脫支架置入組(5647例)。按1∶1的比例進(jìn)行傾向性評(píng)分匹配后，共823對(duì)患者最終

14、納入研究。臨床隨訪資料包括術(shù)后30天、1年和2年的死亡、心肌梗死、靶病變血運(yùn)重建、靶血管血運(yùn)重建、主要心臟不良事件和支架內(nèi)血栓形成。
　　結(jié)果:經(jīng)過(guò)傾向性評(píng)分匹配后COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示術(shù)后2年Hybrid支架治療組靶病變血運(yùn)重建(風(fēng)險(xiǎn)比2.38，95％可信區(qū)間1.50-3.70)、靶血管血運(yùn)重建(風(fēng)險(xiǎn)比1.61，95％可信區(qū)間1.15-2.27)以及主要心臟不良事件(風(fēng)險(xiǎn)比1.37，95％可信區(qū)間1.02-1.85)的風(fēng)險(xiǎn)顯

15、著高于單純DES支架治療組，兩組間全因死亡、心肌梗死和全因死亡/心肌梗死差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:對(duì)于冠狀動(dòng)脈多處病變需置入多支架的患者而言，單純藥物洗脫支架置入的遠(yuǎn)期有效性明顯優(yōu)于混合置入藥物洗脫支架和金屬裸支架，兩種支架置入策略安全性相當(dāng)。
　　第三部分 冠狀動(dòng)脈介入治療后圍術(shù)期心肌梗死風(fēng)險(xiǎn)模型及評(píng)分系統(tǒng)研究
　　目的:既往國(guó)內(nèi)外關(guān)于經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)后圍術(shù)期心肌梗死的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)并無(wú)系統(tǒng)、全面的研究，

16、本研究旨在針對(duì)美國(guó)心血管介入學(xué)會(huì)(SCAI)制定的PMI定義，系統(tǒng)的篩選出圍術(shù)期心肌梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，并建立PMI風(fēng)險(xiǎn)模型及評(píng)分系統(tǒng)，用于全面評(píng)估多個(gè)危險(xiǎn)因素共同作用下圍術(shù)期心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn)。
　　方法:本研究入選了2013年1月至2013月12月間在中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院成功行擇期PCI治療并具備圍術(shù)期心臟損傷標(biāo)志物監(jiān)測(cè)資料的患者共3371例(3516次PCI治療)。根據(jù)患者術(shù)后是否發(fā)生SCAI所定義的圍術(shù)期心肌梗死(PMI)，

17、分為圍術(shù)期心肌梗死組和無(wú)圍術(shù)期心肌梗死組。
　　結(jié)果:在所有成功實(shí)施經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療的3371例患者患者中，有107例患者(3.1％)對(duì)應(yīng)108次PCI治療發(fā)生了圍術(shù)期心肌梗死。通過(guò)多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，影響圍術(shù)期心肌梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素有:年齡(比值比(OR)為1.037，95％置信區(qū)間(CI):1.016-1.058;P＜0.01)、多支血管治療(OR為1.697，95％CI:1.095-2.629;P=0.0