果蠅MBF1通過調控代謝相關基因表達響應冷脅迫.pdf

1、在大自然之中，低溫、氧化、高溫、土壤鹽堿化和干旱等都會對動植物的生長發(fā)育和生存產生不利的影響，例如長勢弱小瘦弱，數量明顯減少，嚴重的還有可能造成絕種。
　　根據以往的研究成果得知，轉錄因子和調節(jié)基因是介導動植物響應逆境脅迫的主要因素。轉錄輔激活因子跟轉錄因子的活性有著密切關系，目前對它的定義基本上都是，通過增強轉錄因子和順式作用元件（例如通用轉錄因子TBP）的結合，從而能夠達到增強轉錄活性的作用。
　　核受體轉錄輔激活因子M

2、BF1是一個在進化上高度保守的序列，其基因序列從古細菌到人都是相當保守的，并且它參與了內皮細胞分化、激素調節(jié)、中樞神經系統的發(fā)育、脂類代謝和組氨酸新陳代謝等不同生物過程。
　　MBF1首次被提純是從蠶的后部絲腺抽提物中，在不同生物體里的MBF1蛋白通過與GCN4、c-Jun、ATF1或其他核受體相互作用而與通用轉錄因子TBP連接，最后激活基因的轉錄。mbf1基因不僅是在進化上高度保守，在功能上也是高度保守的，能參與到多種逆境脅迫反

3、應中，可以通過調節(jié)多種信號途徑以提高對不良環(huán)境的抵抗力。
　　本研究以模式生物果蠅為研究材料，采用提取 RNA，反轉錄，PCR的方法從野生型黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）中克隆得到了全基因組的mbf1序列，其大小為4574bp，并將其命名為gmbf1。
　　我們構建了表達載體CaSpeR-gmbf1，通過顯微注射法，將CaSpeR-gmbf1質粒轉入野生型果蠅中，獲得了 P[gmbf1]轉基因果蠅

4、。通過染色體置換方法，獲得了拯救品系P[gmbf1];mbf1-。分別對野生型、突變體、拯救品系和過表達品系的果蠅進行冷脅迫處理，觀察其成活率情況，結果表明mbf1基因在冷脅迫中發(fā)揮了重要功能。并且在響應冷脅迫過程中，通過熒光定量PCR實驗發(fā)現mbf1基因的表達量升高。免疫熒光染色實驗揭示了轉錄輔激活因子 MBF1在低溫脅迫的過程里能夠從細胞質中轉移到了細胞核中，進一步說明MBF1能夠在這一過程中發(fā)揮作用，從而實現調控目標基因活性的目的

5、，增強其抗寒性。
　　利用Microarray實驗鑒定出相比于野生型果蠅，mbf1突變體果蠅里有哪些基因的表達發(fā)生改變，從中選取與代謝相關的幾個基因，通過熒光定量 PCR實驗鑒定哪些基因與mbf1基因相關，并且參與抗寒性。在mbf1突變體中，Nmdmc和CG5804的表達量降低，CG14893和CG11598的表達量升高。果蠅受到冷處理后，Nmdmc和CG5804的表達量升高，CG14893和CG11598的表達量降低。這些結果表