不同膳食脂肪酸調(diào)節(jié)大鼠肝臟SREBP-1c基因表達(dá)影響NAFLD發(fā)生發(fā)展.pdf

1、在發(fā)達(dá)國(guó)家，NAFLD已是存在于一般人群中最普遍的肝臟疾病。據(jù)估計(jì)，它將在未來(lái)十年內(nèi)成為肝移植最常見的適應(yīng)癥。NAFLD可伴有中度（即脂肪變性）到重度（即脂肪性肝炎和纖維化）肝損害并影響所有年齡段人群。肥胖及其并發(fā)癥（如代謝綜合征、2型糖尿病和心血管疾?。┑娜后w中發(fā)展成 NAFLD的風(fēng)險(xiǎn)增加。至今，尚未發(fā)現(xiàn)治療的有效方法，目前防治 NAFLD的主要措施仍然是通過(guò)能量限制和增加體力活動(dòng)以控制體重。不幸的是，NAFLD病人治療失敗往往是因?yàn)?/p>

2、難以堅(jiān)持而致。
　　有研究表明，日常膳食中不同的脂肪酸構(gòu)成可能影響 NAFLD發(fā)生發(fā)展，甚至有人提出治療NAFLD的有效藥物可能是主要來(lái)源于魚油的n-3 PUFA。本課題組前期進(jìn)行的 NAFLD病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)飽和脂肪酸（主要來(lái)源于豬油）是重慶居民發(fā)生NAFLD的危險(xiǎn)因素，而n-6 PUFA（主要來(lái)自玉米油、豆油）是保護(hù)因素。盡管病例對(duì)照研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)重慶市居民血漿n-3 PUFA水平與NAFLD患病率有關(guān)，魚油的人群干預(yù)研究的結(jié)果

3、不一致，但魚油干預(yù)對(duì)重慶市 NAFLD患者是有益的，但是其作用機(jī)制還不十分清楚。
　　SREBPs是調(diào)控與代謝脂質(zhì)基因相關(guān)表達(dá)的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子，其功能異常對(duì)NAFLD有顯著影響。課題組于肝細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，不同膳食脂肪酸通過(guò)對(duì)固醇元件結(jié)合蛋白1c亞型的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄活性等方面進(jìn)行調(diào)節(jié)，使其對(duì)脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)不斷蓄積的情況產(chǎn)生重要影響。SREBP-1c可能是治療NAFLD的靶點(diǎn)。在本研究中，對(duì)大鼠喂養(yǎng)含10％豬油的飼料用于創(chuàng)建NAFLD

4、模型，探討不同構(gòu)成的膳食脂肪酸對(duì)大鼠的脂質(zhì)代謝產(chǎn)生的影響，對(duì)大鼠 NAFLD發(fā)生和發(fā)展的影響及其與固醇元件結(jié)合蛋白1c亞型的關(guān)系，為NAFLD的防治提供理論依據(jù)。
　　140只SD大鼠，按所需量，隨機(jī)數(shù)據(jù)表法分為5組：NAFLD模型組（n=60）、對(duì)照組（n=20）、MUFA組（n=20）、n-6 PUFA組（n=20）和4:1 n-6/n-3 PUFA組（n=20）。完成分組后的日常喂養(yǎng)情況描述如下：（此處表格省略）
　　

5、每組10只大鼠每周稱重一次，第8周時(shí)，實(shí)施安樂(lè)死。按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分析取出對(duì)應(yīng)部位的肝臟和血液，獲取后續(xù)研究的相關(guān)數(shù)據(jù)。又將另外50只NAFLD模型組大鼠隨機(jī)分成5組，分組情況與上述相同，每組10只大鼠。繼續(xù)喂養(yǎng)8周后，剩余大鼠稱重，實(shí)施安樂(lè)死。按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分析取出對(duì)應(yīng)部位的肝臟和血液，獲取后續(xù)研究的相關(guān)數(shù)據(jù)。采用 HE染色肝組織切片，觀察并半定量分析肝臟細(xì)胞的脂肪病理學(xué)變化的程度。測(cè)定各組大鼠肝臟和血清中脂質(zhì)含量。選用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒?/p>

6、應(yīng)法、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)SREBP-1c和脂肪酸合成酶的蛋白及mRNA表達(dá)。
　　總結(jié)本實(shí)驗(yàn)的主要結(jié)論如下：
　　1.不同膳食脂肪酸對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響。不同膳食脂肪酸飼養(yǎng)8周或16周，就體質(zhì)量的增長(zhǎng)而言，NAFLD模型組顯著高于對(duì)照組和其它膳食脂肪酸組。除NAFLD模型組以外，其余各組間體質(zhì)量無(wú)差異。NAFLD建模成功的大鼠換成其它脂肪酸繼續(xù)飼養(yǎng)8周，各組大鼠體質(zhì)量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.不同膳食脂肪酸對(duì)大鼠脂代謝

7、的影響。與對(duì)照組相比，NAFLD組大鼠血清和肝臟中的總膽固醇和甘油三酯顯著增加，與NAFLD組比較，富含PUFA各組大鼠血清和肝臟TC、TG顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NAFLD建模成功的大鼠換成其它脂肪酸繼續(xù)飼養(yǎng)8周后，各組大鼠血清TC無(wú)明顯差異。模型變4:1 n-6/n-3 PUFA組大鼠血清TG、肝臟TC含量明顯低于模型組，其余各組血清TG、肝臟TC差異不明顯。就肝臟TG含量而言，與模型組相比，模型變對(duì)照組、模型變 n-6PUF

8、A組、模型變4:1 n-6/n-3PUFA組均顯著降低。
　　3.不同膳食脂肪酸對(duì)大鼠NAFLD發(fā)生發(fā)展的影響。NAFLD模型組用含10%豬油的飼料喂養(yǎng)大鼠，8周后，在光鏡下發(fā)現(xiàn)了大鼠肝臟細(xì)胞沉積有大量的脂肪滴，表明已成功構(gòu)建其活體動(dòng)物模型。為了對(duì)不同膳食脂肪酸是否有預(yù)防NAFLD發(fā)生效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，含10%橄欖油、10%玉米油、8%玉米油+2%魚油的飼料飼養(yǎng)大鼠8周，發(fā)現(xiàn)富含PUFA的油脂喂養(yǎng)大鼠后肝臟脂肪變性的程度較輕，尤其是4

9、:1 n-6/n-3 PUFA組大鼠肝臟脂肪沉積最少。NAS與HE結(jié)果基本一致。繼續(xù)喂養(yǎng)至16周，各組大鼠肝臟病理變化的趨勢(shì)與8周時(shí)基本相同。
　　為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)n-3 PUFA對(duì)NAFLD發(fā)展的治療作用，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)把建模成功的剩余大鼠按之前的分組方法再分為5組，用不同飼料繼續(xù)喂養(yǎng)8周后，模型變對(duì)照組肝內(nèi)出現(xiàn)大量的變性脂肪細(xì)胞，明顯的 HB、小葉內(nèi)炎癥和嚴(yán)重纖維化。而模型變對(duì)照組，特別是模型變4:1 n-6/n-3 PUFA組的肝細(xì)

10、胞脂肪變性程度減輕，小葉內(nèi)炎癥明顯改善。說(shuō)明膳食中添加n-3 PUFA干預(yù)或者轉(zhuǎn)變?yōu)榈椭攀?，?duì)改善NAFLD均有積極意義。
　　4.不同膳食脂肪酸對(duì)大鼠SREBP-1c和FAS基因表達(dá)的影響。NAFLD組大鼠肝臟固醇元件結(jié)合蛋白1c亞型、脂肪酸合成酶的蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比，NAFLD組表達(dá)顯著增加，mRNA表達(dá)水平也增加，且兩基因趨勢(shì)一致。與模型組相比，富含多不飽和脂肪酸的4:1n-6/n-3和n-6組，這兩組肝臟固醇元件結(jié)

11、合蛋白1c亞型、脂肪酸合成酶的 mRNA和蛋白表達(dá)水平，顯著下降。說(shuō)明膳食中的飽和脂肪酸上調(diào)大鼠肝臟SREBP-1c、FAS的基因表達(dá)，而在高脂膳食情況下，PUFA尤其是n-3 PUFA可以下調(diào)大鼠肝臟SREBP-1c、FAS的基因表達(dá)。
　　上述結(jié)果提示，高脂膳食尤其是高飽和脂肪酸膳食顯著上調(diào)大鼠肝臟 SREBP-1c和FAS基因表達(dá)，促進(jìn)肝臟脂肪合成。誘導(dǎo)NAFLD的發(fā)生發(fā)展，而低脂膳食或富含PUFA尤其是n-3 PUFA的膳