蛋白酶Nexin-1通過抑制凋亡抑制蛋白XIAP促進AML細胞對阿糖胞苷的敏感性.pdf

1、目的：
　　檢測和探索蛋白酶Nexin-1（PN1）在急性髓系白血?。ˋML）細胞中的表達及其作用，同時驗證在AML中PN1對凋亡抑制蛋白XIAP的抑制作用。進而探索和驗證PN1是否通過抑制AML細胞中XIAP的表達來促進AML對阿糖胞苷的敏感性，為解決AML治療中的阿糖胞苷耐藥問題提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法：
　　通過電轉染和脂質(zhì)體轉染方法分別將PN1質(zhì)粒及siRNA整合入AML細胞中，利用實時熒光定量PCR

2、和Western Blot檢測AML細胞系中PN-1、XIAP的相對表達，采用PI-AnnexinV標記細胞和流式細胞學方法檢測細胞的凋亡。利用CCK8試劑檢測細胞增值，確定阿糖胞苷作用于AML細胞的最適濃度及時間；電轉染PN1質(zhì)粒同時加阿糖胞苷處理AML細胞后，檢測細胞的凋亡情況以判斷AML對阿糖胞苷敏感性，同時檢測PN1和XIAP的表達以確定其作用機制。
　　結果：
　　PN1在五株AML細胞系中均有表達，且表達水平不同

3、。上調(diào)PN1后AML細胞的凋亡增加，且AML細胞內(nèi)XIAP的RNA水平及蛋白水平均降低，下調(diào)PN1后結果相反。經(jīng)阿糖胞苷處理后，AML細胞中XIAP的表達升高。阿糖胞苷處理聯(lián)合轉染PN1后，細胞內(nèi)XIAP較阿糖胞苷單獨處理組低，且細胞凋亡較高。即上調(diào)的PN1可以抑制阿糖胞苷誘導的XIAP的表達。
　　結論：
　　PN1可誘導AML細胞系發(fā)生凋亡，是AML細胞內(nèi)XIAP的天然抑制子。PN1可抑制阿糖胞苷誘導的AML細胞內(nèi)XIA