過表達miR-21通過下調PDCD4促進妊娠滋養(yǎng)細胞疾病的發(fā)生發(fā)展.pdf

1、目的：microRNA是一類能通過轉錄后調節(jié)基因表達的內源性短鏈非編碼RNA， miRNA-21(miR-21)是其中一員，因在許多腫瘤中扮演癌基因樣角色而備受關注。程序性死亡因子4(PDCD4)和PTEN是抑癌基因，功能下調或缺失會促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。妊娠滋養(yǎng)細胞疾病(GTD)的發(fā)病機制尚未完全明了，本研究通過檢測miR-21、PDCD4和PTEN的表達、三者相關性和下游作用因子，以及對滋養(yǎng)細胞功能的影響，旨在明確GTD發(fā)生和妊娠滋養(yǎng)

2、細胞腫瘤(GTN)發(fā)展的調控機制，為耐藥性 GTN尋求新的分子治療靶點，并為葡萄胎(HM)的隨訪提供新的分子標記監(jiān)測物。
　　方法：
　　1)采用qRT-PCR檢測20例正常早孕絨毛及16例HM新鮮組織中miR-21的表達；
　　2)采用ISH、FISH檢測23例早孕絨毛和42例HM石蠟切片中miR-21的表達及分布；
　　3)用IHC檢測53例正常早孕絨毛，98例HM和10例侵襲性HM石蠟切片中PDCD4的表達

3、；
　　4)早孕絨毛和葡萄胎組織各10例，采用qRT-PCR和Western blot分別檢測其中PDCD4和PTEN的mRNA和蛋白的表達；
　　5)采用CCK8法、Transwell法、流式細胞術檢測轉染miR-21 mimic/inhibitor后對絨癌細胞JAR和JEG-3功能的影響；
　　6)熒光素酶報告實驗驗證PDCD4與miR-21是否存在靶向關系，并用qRT-PCR、Western blot檢測調控關系

4、；
　　7)采用qPCR-array技術檢測PDCD4下游作用因子。
　　結果：
　　1) miR-21在HM組織中的表達顯著高于正常早孕絨毛（P<0.05），在絨癌細胞株 JAR和 JEG-3中的表達顯著高于原代培養(yǎng)的正常滋養(yǎng)細胞（P<0.05， P<0.01）；
　　2) PDCD4在HM中表達顯著低于正常早孕絨毛（P<0.001），在侵襲性HM中幾乎失表達(P<0.001)，在絨癌細胞株JAR和JEG-3中

5、的表達低于原代培養(yǎng)的滋養(yǎng)細胞PHT(P<0.01，P<0.01)；
　　3) PDCD4和PTEN均受miR-21的負調控；
　　4)過表達miR-21能促進絨癌細胞的增殖、遷移和侵襲、抑制凋亡，抑制miR-21減弱癌細胞的增殖、遷移和侵襲、增加凋亡；
　　5)沉默絨癌細胞中 PDCD4后金屬基質酶 MMP3、MMP7顯著增加(P<0.001， P<0.001)，金屬基質酶抑制物TIMP1顯著降低(P<0.001)。<