Th22和Treg細(xì)胞在再障患兒外周血中的檢測(cè).pdf

1、再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA）簡(jiǎn)稱再障，是一種由生物、藥物、化學(xué)制劑、物理輻射等多種因素造成骨髓造血干/祖細(xì)胞損傷，最終導(dǎo)致機(jī)體造血功能衰竭，以外周血兩系或三系血細(xì)胞減少、出血、感染及貧血為常見(jiàn)臨床表現(xiàn)的疾病。因其病因復(fù)雜發(fā)病機(jī)理尚未完全清楚，故臨床治療難度較大，尤其是重型再障（SAA），是兒童及成人血液系統(tǒng)中常見(jiàn)的難治性疾病之一。再障病因復(fù)雜發(fā)病機(jī)制尚未清楚，大量可靠文獻(xiàn)研究證實(shí)，骨髓造血微環(huán)境缺陷、造血干/祖

2、細(xì)胞受損和免疫介導(dǎo)損傷等綜合因素導(dǎo)致了 AA的發(fā)病，上述各種機(jī)制干擾患者的正常造血，最終導(dǎo)致骨髓造血功能衰竭。近來(lái)更多的研究表明，免疫調(diào)節(jié)功能紊亂T淋巴細(xì)胞為主和部分B淋巴細(xì)胞過(guò)度活化損傷造血細(xì)胞而致造血功能的抑制，在再障的發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用。文獻(xiàn)報(bào)道60-70％左右的再障患者應(yīng)用抗淋巴細(xì)胞球蛋白（ALG）/抗胸腺球蛋白（ATG）及環(huán)孢霉素（CsA）等免疫抑制劑治療有效，提示以淋巴細(xì)胞表達(dá)水平異常為主的免疫功能紊亂介導(dǎo)的造血抑制是

3、再障發(fā)病不能否定的重要原因。
　　近幾年來(lái)Th22細(xì)胞引起較多學(xué)者的廣泛關(guān)注，它在炎癥性、自身免疫性及血液腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展中均起著重要作用，Th22細(xì)胞的表型分子為CCR6+CCR4+CCR10+，其關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子是AHR。Th22主要分泌IL-22，還可分泌IL-10、IL-6、IL-13等多種細(xì)胞因子，不產(chǎn)生IFN-γ、IL-4和IL-17，是獨(dú)立于Th1、Th2和Th17的效應(yīng)性T細(xì)胞的新亞群，其功能主要通過(guò)IL-22實(shí)現(xiàn)

4、。
　　Th22細(xì)胞主要參與皮膚的自穩(wěn)調(diào)節(jié)和病理狀態(tài)改變。在正常情況下，Th22細(xì)胞與Tre g細(xì)胞、Th17細(xì)胞及其他T淋巴細(xì)胞亞群互相調(diào)控，使機(jī)體免疫處于平衡狀態(tài)。Th22細(xì)胞分泌IL-22、TNF-a等細(xì)胞因子，其中IL-22作為Th22細(xì)胞的主要效應(yīng)因子，能激活殺傷性T細(xì)胞并刺激NK細(xì)胞增殖，而TNF-a則能通過(guò)上調(diào)Fas與Fasl膜表面分子，介導(dǎo)髓系造血細(xì)胞凋亡。有研究表明在AA患者中Th22細(xì)胞表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，

5、重型組高于慢性再障組，且AA患者治療前后網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞的絕對(duì)值均與Th22細(xì)胞的表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)，提示Th22細(xì)胞可能在AA發(fā)病中起著抑制造血的角色。另有研究發(fā)現(xiàn)在經(jīng)臍血干細(xì)胞移植和免疫抑制療法治療后I L-22水平較前下降，患者造血功能恢復(fù)，更證實(shí)了IL-22在AA抑制造血中扮演著重要的角色，并認(rèn)為在AA患者中可能存在Th22和Th17細(xì)胞表達(dá)水平失衡與AA發(fā)生有著密切的關(guān)系。
　　調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulato

6、ry T cells，Treg)是人和動(dòng)物體內(nèi)最為重要的一個(gè)具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，分化來(lái)源包含CD4+ T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4-CD8-T細(xì)胞及部分原始T細(xì)胞等。Treg細(xì)胞在體內(nèi)通過(guò)細(xì)胞接觸和分泌抑制性免疫分子等途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)抑制免疫和誘導(dǎo)免疫耐受，在維持自身免疫防御和調(diào)節(jié)免疫平衡中起著重要作用，而且在自身免疫性疾病、腫瘤、移植耐受或者是病原體感染等免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)中發(fā)揮著不可替代的作用。而TGF-β可以通過(guò)降低胸腺內(nèi)促凋亡分

7、子Bim、Bak和Bax，升高抗凋亡分子Bcl-2的表達(dá)水平，從而減少已分化nTre g細(xì)胞凋亡，并在維持nTre g細(xì)胞胸腺內(nèi)發(fā)育和外周存活中起著重要作用。Treg細(xì)胞在AA患者中表達(dá)水平降低和存在細(xì)胞功能缺陷早已被證實(shí)，研究發(fā)現(xiàn)在各種自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病中TGF-β表達(dá)水平也明顯低于正常且與Treg細(xì)胞表達(dá)水平有較高的相關(guān)性，這提示TGF-β作為Treg細(xì)胞的效應(yīng)分子在上述疾病中也發(fā)揮著重要作用。
　　在AA患者中Th

8、22細(xì)胞及IL-22表達(dá)水平高于正常，而Tre g細(xì)胞及TGF-β表達(dá)水平明顯降低，Treg及其細(xì)胞因子在AA發(fā)病中起著保護(hù)性作用，TGF-β能抑制Th22細(xì)胞分化，在AA患者中Th22、Treg細(xì)胞及其細(xì)胞因子表達(dá)水平均有異常，上述兩類細(xì)胞在AA發(fā)病中有怎樣的變化，及兩者表達(dá)有何關(guān)系，國(guó)內(nèi)尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）的方法分別檢測(cè)重型再障（SAA）和慢性再障（CAA）患兒

9、及健康兒童外周血中Th22和Treg細(xì)胞及其血漿中細(xì)胞因子IL-22、TGF-β的表達(dá)水平，探討上述兩種細(xì)胞及其細(xì)胞因子之間的相互關(guān)系及在再障患兒免疫調(diào)節(jié)紊亂中可能發(fā)揮的作用，為揭示再生障礙性貧血的發(fā)病機(jī)制提供新的啟示，并為未來(lái)治療再障探索潛在的靶點(diǎn)。
　　材料和方法：
　　1.研究對(duì)象
　　收集鄭州大學(xué)第一、第三附屬醫(yī)院2013年6月至2014年8月住院再障患兒53例，其中重型再障(SAA)患兒18例，男12例，女6

10、例，年齡3~13歲；慢性再障(CAA)患兒35例，男19例，女16例，年齡2~14歲；診斷標(biāo)準(zhǔn)參考小兒再障診療建議[4]，被選患兒均系初診，既往均未使用環(huán)孢霉素（CSA）等免疫抑制劑治療或輸血。取本院健康體檢兒童18例為對(duì)照組，女8例，男10例，年齡4~15歲。各組之間性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.方法
　　應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中Th22和CD4+CD25+CD127lowTreg細(xì)胞的表達(dá)水平；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附

11、法檢測(cè)外周血血漿中IL-22、TGF-β的濃度。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)原理
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有原始數(shù)據(jù)均進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），組間比較分析采用LSD-t法，各變量之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)，以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.SAA組患兒外周血中Th2

12、2細(xì)胞表達(dá)水平高于CAA組（P＜0.05），兩組均高于健康對(duì)照組（P＜0.05）；SAA組患兒外周血中CD4+CD25+CD127low細(xì)胞(Treg)表達(dá)水平低于CAA組（P＜0.05），兩組均低于健康對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.SAA組患兒外周血血漿中IL-22濃度高于CAA組（P＜0.05），兩組均高于健康對(duì)照組（P＜0.05）；SAA組外周血血漿中TGF-β低于健康對(duì)照組（P＜0.05），兩組均

13、低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.相關(guān)性分析
　　（1）AA患兒外周血中Th22細(xì)胞比例與IL-22血漿濃度（r=0.78,p＜0.05）呈正相關(guān)，與CD4+CD25+CD127low細(xì)胞（Treg細(xì)胞）比例（r=-0.53,p＜0.05）呈負(fù)相關(guān)；Tre g細(xì)胞比例與TGF-β血漿濃度（r=0.46，p＜0.05）呈正相關(guān)。
　?。?）AA患兒外周血血紅蛋白與Th22細(xì)胞（r=-0.31，p

14、＜0.05）及血漿IL-22（r=-0.34，p＜0.05）呈負(fù)相關(guān)，與外周血 CD4+CD25+CD127low細(xì)胞的表達(dá)（r=0.54,p＜0.05）及TGF-β血漿濃度（r=0.59, p＜0.05）均呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.AA患兒外周血中Th22細(xì)胞及IL-22表達(dá)水平高于正常兒童，AA患兒外周血中Tre g細(xì)胞及TGF-β表達(dá)水平低于正常兒童。
　　2.在AA患兒中可能存在Th22細(xì)胞與Tre g細(xì)