基于量子點熒光探針的腫瘤標志物GP73和腺苷的分析方法研究.pdf

1、量子點(quantum dots，QDs)又稱半導體納米晶，與傳統(tǒng)熒光染料相比有很多獨特的優(yōu)良性質，如熒光量子產(chǎn)率高、吸收光譜寬、發(fā)射光譜窄而對稱、斯托克斯位移大、耐光漂白等。作為一種新型的納米熒光探針，QDs在生物組織成像、免疫分析等方面顯示了廣闊的應用前景。但是在生物分子檢測中，QDs與不同的物質會發(fā)生非特異性吸附，其熒光信號容易被樣品中的各種雜質干擾，從而影響靶物質的檢測。而生物樣品的背景熒光干擾也會降低QDs檢測的靈敏性。因此，

2、如何提高QDs熒光探針檢測生物分子的特異性和靈敏度，仍是需要研究的問題。本文利用QDs分別發(fā)展了一種新型熒光免疫探針和離子交換熒光信號放大方法，并分別將其應用于腫瘤標志物高爾基體糖蛋白73(golgi protein-73，GP73)和腺苷的牛物分析中，以提高QDs熒光探針的特異性和靈敏度。主要研究內(nèi)容包括：
　?、臛P73作為一種新型肝癌診斷的標志物，在正常人肝組織中很少表達，而在慢性肝臟疾病中，患者血清GP73含量升高，特別是

3、在早期肝細胞性肝癌表現(xiàn)得尤為顯著。大量研究發(fā)現(xiàn)，對于早期肝癌的診斷，GP73的敏感性要優(yōu)于肝癌的另一血清標志物甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)。臨床上檢測GP73的方法只有酶聯(lián)免疫吸附試驗，但是該方法操作復雜，費時較長。因此建立快速、簡便地檢測血清中GP73的方法非常重要。本文以GP73為目標分析物，利用Mn修飾CdTe/CdS QDs標記GP73抗體，然后與蛋白質A/G瓊脂糖微珠結合形成新型的免疫熒光探針，用于特

4、異性地檢測血清樣品中的GP73?；贕P73對QDs-GP73抗體-蛋白質A/G瓊脂糖微珠免疫探針的熒光猝滅作用，我們建立了一種簡單、快速、低成本測定GP73的方法。在最優(yōu)條件下，當GP73濃度在20-150 ng mL-1范圍內(nèi)，上述免疫熒光探針與GP73濃度呈良好的線性關系，相關系數(shù)為0.9935，檢測限（3(6)/K）為10 ng mL-1。
　?、芉Ds納米粒子由于其獨特的金屬組成成分，被廣泛地應用于各種信號放大免疫技術中

5、。在本研究中，我們利用QDs納米粒子發(fā)展了一種新型的離子交換熒光信號放大體系。首先利用適配體片段1(target binding aptamer1，TBF1)結合的Fe3O4磁性納米粒子作為分離工具，適配體片段2(target binding aptamer2，TBF2)結合的CdTe QDs作為檢測探針，在靶物質的存在下，形成Fe3O4-TBF1-target-QDs-TBF2三明治結構體系。磁性分離后，加入一定量過量的Ag+作為離子

6、交換溶液，由于三明治結構中的QDs含有Cd2+，AgTe相比于CdTe更具有熱力學穩(wěn)定性，因此在常溫下Ag+就能夠快速地將Cd2+置換出來，將QDs完全破壞。再經(jīng)磁性分離后，上清液中剩余的Ag十可以定量地反映出三明治結構中結合的QDs的濃度，從而得到靶物質的濃度。而上清液中剩余的Ag+濃度可以通過CdTe QDs進行檢測，因此具有很高的靈敏性和準確性。該方法不需要使用其它昂貴的熒光檢測探針，操作簡單，快速且靈敏度高。我們將該方法應用于腫