穴位注射聯(lián)合中藥貼敷對支氣管哮喘大鼠的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察穴位注射草分枝桿菌與中藥穴位貼敷對支氣管哮喘大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)水平、肺組織白介素10(IL-10)、白介素17(IL-17)、細(xì)胞粘附因子1(ICAM-1)表達(dá)的影響，探討穴位注射、穴位貼敷中醫(yī)外治法對支氣管哮喘的作用機(jī)制，為中醫(yī)外治法治療支氣管哮喘的臨床應(yīng)用提供有力依據(jù)及參考。
　　方法：SPF級Wistar雄性大鼠60只適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，隨機(jī)分為對照組、模型組、草分枝桿菌穴位注射組（穴注組）、中藥貼敷組（貼

2、敷組）、和穴位注射聯(lián)合中藥貼敷組（穴注+貼敷組），每組12只。復(fù)制卵蛋白（OVA）大鼠哮喘模型，分為致敏階段與激發(fā)階段進(jìn)行。除對照組，其余大鼠分別于第1天、第8天腹腔注射OVA、氫氧化鋁混懸溶液（10％的OVA及10%的氫氧化鋁）1ml致敏，對照組注射同量的生理鹽水。第15天，各組均給予密閉霧化，大鼠置于密閉霧化箱中，以2%OVA溶液超聲霧化激發(fā)，對照組以生理鹽水代替，每天一次，每次30min；相比對照組觀察霧化時各組大鼠行為變化，出現(xiàn)

3、煩躁、搔鼻、咳嗽、呼吸頻率加快且幅度加大、明顯的腹式呼吸、點頭呼吸，甚至四肢癱軟俯伏不動、大小便失禁等現(xiàn)象視為激發(fā)成功。連續(xù)激發(fā)7天，后改為每周激發(fā)2次。連續(xù)激發(fā)哮喘發(fā)作7天后，對照組正常喂養(yǎng)，其余各組進(jìn)行治療。取穴大椎、雙定喘、雙肺俞、雙脾俞、雙腎俞，穴注組行草分枝桿菌穴位注射，五組穴位每日輪流取穴注射；貼敷組行貼敷2號穴位貼敷，每貼6h；穴注+貼敷組穴位注射后隨即進(jìn)行中藥貼敷6h；對照組取穴同治療組，以同量的生理鹽水及空貼代替。隔天

4、操作一次，3次為一療程，共進(jìn)行四個療程。肺組織 HE染色觀察氣道炎癥情況，ELISA法檢測血清 IgE、肺組織勻漿IL-10及IL-17的含量；免疫組織化學(xué)（SABC）法檢測肺組織ICAM-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)：對照組大鼠呼吸平穩(wěn)，霧化時可見蜷縮抱團(tuán)休息現(xiàn)象，無喘促等特殊表現(xiàn)，霧化后精神、飲食正常；模型組大鼠霧化激發(fā)時不同程度出現(xiàn)呼吸頻率快，張口呼吸、點頭呼吸，噴嚏，撓鼻，煩躁不安，腹肌抽動，口

5、鼻及爪甲處紫紺，甚至行動緩慢，癱軟，大小便失禁等，隨激發(fā)次數(shù)增加而癥狀逐步加重，其中由于哮喘發(fā)作死亡1只，數(shù)次激發(fā)后大鼠活動、飲食明顯減少，且有毛色無華，豎毛等表現(xiàn)，大鼠模型具備哮喘特征。穴注組、貼敷組、穴注+貼敷組上述癥狀表現(xiàn)不明顯，可見煩躁不安、點頭樣呼吸、搔鼻，但口唇爪甲紫紺較輕，個別可見伏地不動，大小便失禁，但隨激發(fā)次數(shù)減少及治療次數(shù)增多，激發(fā)表現(xiàn)逐漸好轉(zhuǎn)，穴注+貼敷組好轉(zhuǎn)較明顯，治療組霧化后飲食活動未見明顯變化。
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6、.HE染色。對照組：細(xì)支氣管上皮完整，形態(tài)規(guī)則，支氣管管壁未見增生，肺泡形態(tài)規(guī)則，肺泡壁規(guī)整，未見增生及炎性浸潤。模型組：氣管周圍及肺組織大量炎性細(xì)胞浸潤，支氣管狹窄變形，腔內(nèi)可見脫落上皮細(xì)胞，黏膜皺襞增多，黏膜水腫，肺泡壁及肺間隔明顯增厚、充血，肺泡腔明顯變小甚至消失。穴注組：與模型組相比，炎性細(xì)胞浸潤減輕，支氣管形態(tài)稍有狹窄等改變，肺泡壁及肺間隔增厚減輕，肺泡形態(tài)欠規(guī)則。貼敷組：與模型組相比，細(xì)支氣管形態(tài)較規(guī)則，腔內(nèi)未見明顯上皮細(xì)胞

7、脫落，管壁有炎性細(xì)胞浸潤，平滑肌有所增厚，肺泡壁及肺間隔可見增厚減輕，肺泡形態(tài)欠規(guī)則。穴注+貼敷組：細(xì)支氣管形態(tài)較規(guī)則，管周可見炎性細(xì)胞，管壁輕度增生，黏膜較正常，肺泡腔形態(tài)尚可，個別肺泡壁有所增厚及炎性細(xì)胞增多。
　　3.IgE含量測定結(jié)果。模型組血清IgE明顯高于對照組，有顯著性差異；穴注組、貼敷組、穴注+貼敷組三組大鼠的IgE含量均低于模型組，有顯著差異；穴注+貼敷組IgE含量較穴注組、貼敷組低；穴注組與貼敷組IgE含量無明

8、顯差異。
　　4.IL-10含量測定結(jié)果。模型組肺組織IL-10含量明顯低于對照組，有顯著性差異，穴注組、貼敷組、穴注+貼敷組三組大鼠的IL-10含量均高于模型組，差異顯著，穴注+貼敷組 IL-10含量較穴注組、貼敷組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，穴注組與貼敷組 IL-10含量無明顯差異。
　　5.IL-17含量測定結(jié)果。模型組肺組織IL-17含量明顯高于對照組，有顯著性差異；與模型組相比，穴注組、貼敷組、穴注+貼敷組三組大鼠的IL

9、-17含量減低，有顯著差異；穴注+貼敷組 IL-17含量較穴注組、貼敷組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，穴注組與貼敷組IL-17含量無明顯差異。
　　6 ICAM-1表達(dá)。免疫組化可見，對照組支氣管周圍可見少量陽性細(xì)胞；模型組支氣管周圍以及支氣管分泌物及肺間質(zhì)、肺泡壁棕黃色顆粒表達(dá)較多；穴注組和貼敷組支氣管周圍、肺間質(zhì)肺泡壁棕黃色顆粒較模型組少；穴注+貼敷組支氣管周圍、肺間質(zhì)、肺泡壁棕黃色陽性細(xì)胞表達(dá)不明顯。各組平均光密度值比較：模型組肺組

10、織ICAM-1表達(dá)明顯高于對照組，有顯著性差異，穴注組、貼敷組、穴注+貼敷組三組大鼠的ICAM-1表達(dá)均低于模型組，差異顯著，穴注+貼敷組 ICAM-1表達(dá)較穴注組、貼敷組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，穴注組與貼敷組ICAM-1表達(dá)無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1.根據(jù)模型組大鼠癥狀表現(xiàn)以及各項檢測指標(biāo)，HE染色提示，支氣管哮喘大鼠造模成功。
　　2.支氣管哮喘大鼠血清IgE的含量增多，肺組織IL-10含量減少、IL-17含量