Dock1對缺氧-復氧誘導的H9C2心肌細胞凋亡和增殖的影響及其機制研究.pdf

1、目的：探討鳥苷酸交換因子Dock1對缺氧/復氧誘導的H9C2心肌細胞凋亡和增殖的影響及相關的分子機制。
　　方法：用陰性對照慢病毒（NC shRNA）和靶向Dock1基因沉默慢病毒（Dock1 shRNA）分別感染大鼠H9C2心肌細胞，用嘌呤霉素來篩選并建立慢病毒感染有效的細胞株。再用重組人Dock1過表達質粒（hDock1-pCXN2-Flag）和重組真核空載質粒（pCXN2-Flag）分別隨機轉染Dock1沉默細胞。將上述干預

2、后的三組細胞各備兩份，并隨機從中取一份進行缺氧/復氧（H/R）干預。將實驗細胞分為6組：Ⅰ:陰性對照組（ NC shRNA）;Ⅱ:Dock1沉默+空質粒組（ Dock1 shRNA）;Ⅲ:Dock1沉默+人Dock1過表達組（Dock1 shRNA+hDock1）;Ⅳ:陰性對照＋缺氧/復氧組（NC shRNA+H/R）Ⅴ:Dock1沉默+空質粒＋缺氧/復氧組（Dock1 shRNA+H/R）;Ⅵ:Dock1沉默+人Dock1過表達＋缺氧

3、/復氧組（Dock1 shRNA+hDock1+H/R）。采用RT-PCR檢測Dock1 mRNA表達水平，Western blot法檢測Dock1、AKT、p-AKT、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和Flag蛋白表達水平，MTT法檢測各組增殖率，流式細胞術（FCM）檢測各組凋亡率。
　　結果：細胞的慢病毒感染率達80％。與陰性對照組比較，Dock1沉默干預組Dock1 mRNA、Dock1蛋白、p-AKT蛋白、p-ERK1

4、/2蛋白、Bcl-2蛋白和細胞增殖率均顯著降低，而Bax蛋白和細胞凋亡率均顯著增加。與Dock1沉默組比較，Dock1沉默+過表達組存在human Dock1 mRNA表達，而rat Dock1 mRNA表達差異無統(tǒng)計學意義，Dock1蛋白、p-AKT蛋白、p-ERK1/2蛋白、Bcl-2蛋白和細胞增殖率均顯著增加， Bax蛋白和細胞凋亡率均顯著降低。與對應正常條件培養(yǎng)各組比較， H/R干預各組的Dock1 mRNA、Dock1蛋白、p

5、-AKT蛋白、p-ERK1/2蛋白、Bcl-2蛋白和細胞增殖率均顯著降低，Bax蛋白和細胞凋亡率均顯著增加(所有P＜0.05）。
　　結論：在體外H9C2心肌細胞實驗中：成功實現(xiàn)缺氧/復氧（缺血/再灌注）損傷模型；沉默Dock1基因可加重模型所致的凋亡增加和增殖降低，而過表達Dock1基因可逆復模型所致的上述損傷。因而得出結論：Dock1能抑制H9C2心肌細胞的凋亡、協(xié)助其增殖，且和Dock1的表達水平呈正相關關系，這種作用是通過