EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細胞永生細胞株長期傳代后的遺傳穩(wěn)定性.pdf

1、用EB病毒轉(zhuǎn)化外周血B淋巴細胞建立的永生細胞株，因其可以在傳代培養(yǎng)的條件下，源源不斷地為各種遺傳性疾病、免疫學、細胞生物學研究提供DNA和細胞而在基礎生命科學研究中受到重視.本實驗的目的是檢測傳代培養(yǎng)的永生細胞株在長期傳代的過程中細胞和分子遺傳學方面能否保持穩(wěn)定，這關系到評價永生細胞株提供DNA的科學研究實驗結(jié)果準確性的重要問題。 本實驗從染色體、高突變微衛(wèi)星位點及端粒酶活性三方面選取10株永生細胞株對永生細胞株的細胞和分子遺傳

2、學特征進行檢測。在染色體方面，細胞株每隔10代，即10代、20代……時，取出進行染色體標本的制備，統(tǒng)計細胞株分裂相及亞二倍體、超二倍體和多倍體的發(fā)生率。在微衛(wèi)星位點檢測方面，從核基因組和線粒體基因組上分別選取突變率>0.09％的13個位點及D-loop區(qū)高突變的2個位點，對細胞株的血樣及每隔10代取出的細胞抽提的DNA用PCR擴增進行變性后，以聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測縱向比較，檢測在這些高突變的位點區(qū)域是否有突變的發(fā)生。在細胞株端粒酶活性

3、檢測方面，將10株細胞株在培養(yǎng)過程中的不同代次取出，以Hela細胞株的細胞提取液作為端粒酶實驗的陽性對照，進行端粒酶活性檢測。 檢測結(jié)果表明，本研究室采用EBV轉(zhuǎn)化B淋巴細胞建立的永生細胞株在傳代培養(yǎng)的30代之內(nèi)遺傳特征是穩(wěn)定的。繼續(xù)傳代培養(yǎng)后，細胞株的生長速度減慢，細胞分裂相減少，其中細胞株Yao56和Yao43分別在30代和60代后分裂相出現(xiàn)多倍體，而Yao225和Yao230在50代后死亡。10株細胞株中，Yao262傳至