Erlotinib通過ROS介導JNK通路誘導NSCLC細胞凋亡的機制及臨床研究.pdf

1、分類號：R563密級：公開UDC：610學校代碼：11065博士專業(yè)學位論文Erlotinib通過ROS介導JNK通路誘導NSCLC細胞凋亡的機制及臨床研究山鳳蓮指導教師程兆忠（教授）學科專業(yè)名稱內科學（呼吸系?。┱撐奶峤蝗掌?017年3月23日論文答辯日期2017年5月26日答辯委員會主席董亮（教授）Ⅱ制腫瘤細胞增殖，為肺腺癌治療藥物的作用機制及耐藥研究提供理論基礎。第二部分實驗探討調節(jié)性T淋巴細胞(regulatyTcellTreg

2、)各亞群和調節(jié)性B淋巴細胞（regulatyBcellBreg)在EGFR陽性肺腺癌患者外周血中的表達水平及口服厄洛替尼藥物的影響。方法：方法：第一部分實驗研究中，研究了ERL對人肺癌A549細胞的抗癌作用及其潛在的機制。MTT法檢測ERL對A549的細胞活性的抑制作用。應用Hoechst33342染色和FACS測定法檢測ERL誘導A549細胞凋亡作用；使用DCFHDA熒光標記檢測A549細胞內活性氧（reactiveoxygenspe

3、cies，ROS）的含量，JC1染色測量線粒體膜電位（MMP）。通過蛋白質印跡法(WesternBlot)測定ERL對JNK蛋白的磷酸化狀態(tài)和下游凋亡相關蛋白的的表達影響。第二部分實驗研究中采集19例晚期肺腺癌患者和20例健康人的外周血樣，通過流式細胞儀分析其外周血中Treg和Breg的比例，分別以CD4CD25標記Treg、以CD45RA、CD4、CD25來標記Treg亞群（rTregnonTregaTreg）、以CD19CD24hi

4、CD27標記Breg。結果：結果：1體外實驗發(fā)現ERL可以顯著抑制A549的細胞生長，且呈現濃度依賴性。Hoechst33342染色證實ERL誘導人非小細胞肺癌細胞凋亡，與藥物濃度相關。將肺癌A549細胞與不同濃度的ERL（0，5，10，15，20，25，30，35，40，45μmolL）孵育24小時。MTT檢測顯示在體外不同濃度ERL對肺癌A549細胞的增殖產生不同程度的抑制作用，越高濃度的ERL對細胞增殖的作用越明顯，說明ERL的抑

5、制作用有濃度依賴性。我們的實驗研究結果顯示ERL對A549細胞的24h小時半數抑制濃度（IC50）為23.09μgml。Hoehcst染色結果顯示，25μmolL組的染色細胞出現細胞核的碎裂、大小不等的圓形小體，表現出調亡的狀態(tài)。當濃度為45μmolL時，細胞內調亡小體的形成，細胞破碎，呈高強度藍色熒光?？梢姰敿尤氩煌瑵舛鹊腅RL（0，5，10，15，20，25，30，35，40，45μmolL）時，凋亡細胞的數量明顯增加，并呈劑量濃度