Lactoferricin B基因與幾種變異克隆的構建及其在釀酒酵母中的表達與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的 構建牛乳鐵多肽(Lactoferricin B)的真核表達質粒。pYES2/LactoferricinB，實現(xiàn)其在釀酒酵母S.cerevisiae中的表達，初步檢測其不同變異的體外抗菌活性。 方法 通過分別合成Lactoferdcin B基因兩條單鏈的部分序列，讓其互為模板、引物進行PCR擴增，得到Lactoferricin B與幾種變異的基因序列。將它們克隆到穿梭質粒pYES2中，構建重組質粒pYE

2、S2/Lactoferricin B等，轉化到大腸桿菌Top10中，讓其大量增殖。提取目的質粒經純化后將轉化到S.cerevisiae中，通過營養(yǎng)缺陷型篩選獲得重組酵母菌并通過半乳糖誘導使其表達目的蛋白。經離子交換柱純化收集目的蛋白后，通過體外抑菌實驗比較其抗菌活性。 結果 提取含該片段的重組質粒經PCR擴增檢驗、DNA測序表明，所得幾種質粒分別包含了Lactoferdcin B與幾種變異的基因序列，即成功構建了目的

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