谷氨?；D(zhuǎn)移酶的制備及其作為參考物質(zhì)特性的研究.pdf

1、隨著人們對(duì)酶標(biāo)準(zhǔn)化工作和計(jì)量學(xué)溯源體系的深入認(rèn)識(shí)，參考方法、參考物質(zhì)和參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的結(jié)合成為國(guó)內(nèi)外普遍認(rèn)可的實(shí)現(xiàn)酶活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化的重要途徑，而使用公認(rèn)的酶校準(zhǔn)物作為載體，將測(cè)定結(jié)果的數(shù)值在參考方法和常規(guī)方法間進(jìn)行準(zhǔn)確性的傳遞是目前酶標(biāo)準(zhǔn)化工作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。雖然我國(guó)的室間及室內(nèi)質(zhì)量控制工作在臨床實(shí)驗(yàn)室中已廣泛開(kāi)展，酶校準(zhǔn)品的應(yīng)用價(jià)值也更受關(guān)注，但目前我國(guó)使用的酶校準(zhǔn)品和質(zhì)控品基本依賴進(jìn)口，價(jià)格昂貴，在不同的測(cè)定儀器和試劑上應(yīng)用時(shí)受到互

2、通性限制。所以，對(duì)于我國(guó)的酶標(biāo)準(zhǔn)化工作來(lái)說(shuō)，實(shí)現(xiàn)參考物質(zhì)的國(guó)產(chǎn)化是目前面臨的重要課題。 本文谷氨?；D(zhuǎn)移酶(GGT，EC2.3.0.2)是從豬腎皮質(zhì)中提取的。經(jīng)過(guò)勻漿，DOC溶解和硫酸銨分級(jí)沉淀粗提取，木瓜蛋白酶的消化酶解，再經(jīng)過(guò)脫鹽、DEAE陰離子交換層析和Superdex 75 pg凝膠層析，得出高比活高純度的GGT樣品。該樣品應(yīng)為豬腎皮質(zhì)全分子的水溶性輕鏈，分子量為21kD，純化后的比活為124U/mg。經(jīng)SDS-PAG

3、E電泳檢驗(yàn)，為單一條帶，證明樣品高純度。 初步建立了GGT參考測(cè)定方法，并對(duì)純化后蛋白的保存基質(zhì)進(jìn)行了穩(wěn)定性和互通性研究。初步的觀察結(jié)果表明，120天內(nèi)，4℃和-20℃時(shí)GGT在CRM基質(zhì)和自制基質(zhì)中保持穩(wěn)定，37℃下活性濃度損失均小于5﹪；在人血清基質(zhì)中4℃保存的樣品40天內(nèi)活性濃度下降15.2﹪，37℃保存的樣品在15天內(nèi)活性下降1.9﹪，40天內(nèi)下降39﹪。在兩種常規(guī)方法和參考方法的比較中，僅CRM基質(zhì)的高值樣本偏于95