低強(qiáng)度超聲對子宮腺肌病不孕患者在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一節(jié)子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)分子在體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的表達(dá)
　　目的：通過對子宮腺肌病不孕患者和健康婦女子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，獲取足夠的內(nèi)膜上皮細(xì)胞供后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究，并檢測子宮內(nèi)膜容受性分子αvβ3，LIF，HOXA10在子宮腺肌病不孕患者和健康婦女在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的表達(dá)，探討子宮腺肌病不孕的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：分別選取子宮腺肌病不孕患者（實(shí)驗(yàn)組）和健康婦女（對照組）分泌中期在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)，

2、應(yīng)用膠原酶消化法提取原代在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞并用角蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定， western blot檢測各組在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞αvβ3，LIF，HOXA10的表達(dá)。
　　結(jié)果：從在位子宮內(nèi)膜組織中成功獲取原代子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞并進(jìn)行傳代培養(yǎng)。應(yīng)用角蛋白抗體對細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定，證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞。經(jīng)Western Blot方法檢測發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組和對照組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞都有αvβ3,HOXA10,LIF蛋白表達(dá)

3、。而在對照組子宮內(nèi)膜細(xì)胞的表達(dá)明顯高于實(shí)驗(yàn)組患者子宮內(nèi)膜,差異有顯著性(P<0.01)。
　　結(jié)論：應(yīng)用膠原酶消化法能成功獲得子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞并能進(jìn)行傳代培養(yǎng)，從而提供足夠的細(xì)胞來源供進(jìn)一步研究。子宮腺肌病不孕患者在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞的子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)因子αvβ3, HOXA10, LIF較正常內(nèi)膜上皮細(xì)胞有著更低的表達(dá)。
　　第二節(jié)低強(qiáng)度超聲對體外培養(yǎng)的子宮腺肌病不孕患者在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞粘附的作用
　　目的：探討不同超

4、聲強(qiáng)度的低強(qiáng)度脈沖超聲對體外培養(yǎng)的子宮腺肌病不孕患者在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的影響。
　　方法：選取第二部分第一節(jié)實(shí)驗(yàn)中獲取的 P1代子宮腺肌病不孕患者子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)后，用不同超聲強(qiáng)度（15、30、60 mW/cm2）的脈沖超聲刺激7天（每天20分鐘）。用細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測作用后細(xì)胞的粘附率，ELISA技術(shù)檢測最適作用強(qiáng)度作用于子宮腺肌病不孕患者在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的ICAM-1的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：對細(xì)胞予以不同強(qiáng)度（1

5、5、30、60 mW/cm2）的 LIPUS連續(xù)刺激7天后（每天刺激20分鐘），細(xì)胞粘附能力增加，30、60mW/cm2增高達(dá)2倍以上，與15 mW/cm2刺激組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但30，60 mW/cm2組間差異不明顯。而15 mW/cm2僅有輕微的增高。隨著作用時(shí)間的延長，細(xì)胞黏附能力增加。從第3天開始，差異明顯。第4天后粘附率升高趨于平緩。在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞予以30MW/CM2 LIPUS刺激7天后，收集各組上清，結(jié)果提示

6、上清中的ICAM-1濃度較對照組升高，以第3~7天明顯，有顯著性差異（P<0.05），第4天后濃度升高趨于平緩。
　　結(jié)論：低強(qiáng)度脈沖超聲能促進(jìn)子宮腺肌病不孕患者在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的粘附力增加，促進(jìn)細(xì)胞間粘附分子的合成，從而增進(jìn)子宮內(nèi)膜的容受性。
　　第三節(jié)低強(qiáng)度超聲對子宮腺肌病不孕患者在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)分子的作用
　　目的：探討低強(qiáng)度脈沖超聲對子宮腺肌病不孕患者在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)

7、分子的影響。
　　方法：取第二部分第一節(jié)實(shí)驗(yàn)中獲取的 P1代子宮腺肌病不孕患者在位子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)后予以30 mW/cm2的脈沖超聲作用7天（每天20分鐘）。分別用western blot， RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞中αvβ3,LIF，HOXA10的蛋白水平及mRNA的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：30mW/cm2的LIPUS作用于細(xì)胞后，細(xì)胞αvβ3，LIF， HOXA10的蛋白表達(dá)水平分別都增高達(dá)2.03倍，1.95倍，2.