腺病毒介導(dǎo)表達(dá)NM23基因的人胃癌細(xì)胞株BGC-823的建立.pdf

1、目的：通過構(gòu)建攜帶有NM23基因的重組腺病毒載體并加以鑒定，包裝腺病毒并感染人胃癌細(xì)胞株BGC-823，觀察其對人胃癌細(xì)胞株BGC-823細(xì)胞凋亡的影響，從而建立表達(dá)NM23基因的人胃癌細(xì)胞株BGC-823。
　　方法：⑴以質(zhì)粒NM23-PIRES2-EGFP為模版，采用PCR法擴增出NM23基因，克隆至腺病毒載體 pCMV-MCS-IRES-EGFP上，形成重組腺病毒載體pCMV-NM23-IRES-EGFP并酶切鑒定及基因測序

2、；⑵包裝病毒并檢測其滴度，確定腺病毒感染人胃癌細(xì)胞株BGC-823的最佳MOI值。⑶將人胃癌細(xì)胞株BGC-823分為實驗組(NM23-OE組，感染pCMV-NM23-IRES-EGFP)、空白組(Ctrl組)，陰性對照組(NC組，感染pCMV-MCS-IRES-EGFP)。⑷分別用Real Time PCR和Western Blot檢測3組細(xì)胞中NM23基因mRNA和蛋白表達(dá)。⑸通過流式細(xì)胞儀檢測3組胃癌細(xì)胞株BGC-823的凋亡率。<

3、br>　　結(jié)果：①經(jīng)酶切鑒定和基因測序證實成功構(gòu)建重組腺病毒pCMV-NM23-IRES-EGFP；②經(jīng)擴增后，重組腺病毒的滴度為4.0x1010 ifu/mL；③Real Time PCR和Western Blot結(jié)果顯示：陰性對照組與空白組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，而實驗組的NM23的mRNA和蛋白表達(dá)顯著高于其他兩組(P＜0.05)；④實驗組BGC-823細(xì)胞的凋亡率也顯著高于其他兩組(P＜0.05)。
　　結(jié)論