擬南芥CSN1對COP1細胞內(nèi)定位的影響以及CSN1生物學功能的進一步探討.pdf

1、I盟些叢盥塋也韭L』城亟垡恥捌旦韭地蚶出生縫唑鞋盥娶垡址土盟芏=盥蛐螬—刪目錄摘第一章綜述～7第一節(jié)CSN復合體概進7凹、CSN復合體的發(fā)現(xiàn)7CSN復合體的結構11i成和分布8CSN復弁體的生化活性9CSN復臺體與泛錄／26S蚩閂酶體臍解途徑J0泛索／26S蛋口酶體降解途徑簡介10(二)26S蛋白脯體12(三)CSN復合體與26S蛋白酶體的關系13(四)CSN復臺體與泛桑／26S蛋臼酶體降解途徑的關系14五、CSN復合體的細胞功能15C

2、SN復合體和細胞捌期～15CSN復合體和摹兇表達16(三)CSN復合體和DNA修復1A、CSN復合體在植物生長發(fā)育葉]的重要作用178七、CSN復合體LlCSNI的功能19幫二節(jié)植物光信號傳遞選釋研究進展。21、概述一2l_二、COP／DEF／FUS蛋白研究進展21三、COPI結構、分布和功能段研究進展22第二節(jié)研究內(nèi)容和意義24第二章CSNl對COPI細胞山定位的影響25引言。25第一竹材料與方法25一、材料25一、方法26(一)質(zhì)粒

3、的構建及箍定26(二)基凼槍法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮蜘胞，29(一)酵母雙雜交分析實驗32(四)擬南芥萌發(fā)、雜交與GUS染色36五)原核表達體系操作及PulI—down實驗37第二：符結果與分析一、洋慧表皮細胞中擬南撲CSN復合體的業(yè)基對COPI40業(yè)細胞定位帕影響盟生堅赴世羔韭監(jiān)上j虹恥Ⅱ羔盟型旦韭地必岫丘世咀鞋咀盔垡盟d_塹噬坳監(jiān)蛆韭—必摘要刪Y22㈣27㈣595cl】P9信號復合體(CSN)是一個保守的蛋白復合件由8個下硎的皿_Ii組成依次

4、命名為CSNICSN8。CSN復合體最初足在對擬南莽光形態(tài)發(fā)生的遺傳學研究tJ被發(fā)現(xiàn)的，r被變體幼苗都呈現(xiàn)組成型光形態(tài)建成的表型。CSN、COPI以及COPIO—DDBl一DETI(CDD)復合體都是調(diào)節(jié)植物光反應和發(fā)育的關鍵因子。COPl受到光信號影響會改變其在細胞核與細胞質(zhì)巾的丹布比例，早期擬南芥遺傳學研究發(fā)現(xiàn)COPI的細胞核定位需要CSN復合體的存在但CSN復合體影響COPI的細胞內(nèi)定位的分子機制還沒有報道。為了探討COPI在細胞

5、內(nèi)定位的分子機制利用洋蔥表皮細胞瞬間表達系統(tǒng)，我們發(fā)現(xiàn)批表達的CSNI能夠促進GUS—COPI的細胞核定位，且CSNI的N一術端是促進GUSCOPl細胞核定位的關鍵。同時利用擬卣井csn／突變體，證實CSNi的N一末端是COPl實現(xiàn)細胞核定位不可缺少的蛋白片段。進而利用酵母積雜交系統(tǒng)檢測發(fā)現(xiàn)CSNl通過其N一末端結構域直接和COPl的coiledcoiI結構域發(fā)生相互作用并且通過免疫jt沉淀實驗證實COPl乖lCSN復合體在擬南芥體內(nèi)存

6、在豐f『互作j目。此外tCSNIxj『coPl細胞棱定位的促進作用需要COPl自身細胞核定位信號的參與，同時也與COP|的coiledcoll結構域有關。COPI的coiled—coil結構域不僅是CSNI的結合區(qū)。還包含了coPl細胞質(zhì)定位信號的一部分。這些發(fā)現(xiàn)使我(flCSN復臺體影響COPl的細胞定位的機制有了進一步的了解為々后深入研究CSN復臺體調(diào)控植物光形態(tài)發(fā)生的分予機制提供了一定的儆據(jù)。CSN復合體最初被定義為擬南芥光形態(tài)發(fā)

7、生的抑制因子，隨著研究的深入人們發(fā)￡ECSN復合體參與真核生物的各種生長發(fā)育過程以及細胞周期等細胞變化進程。CSNI業(yè)基的卜末端包含一個PCI結構域該結構域負責蛋白業(yè)基與亞基的相互作jij以及CSN復臺體的形成。CSNl的N一末端小參與CSN復合體的彤成，但是對CSN復合體的功能起著重要作刷，為了深入r解CSN復合體如何通過CSNl調(diào)控植物的生K發(fā)育等過程奉研究利用酵母取雜交文庫篩選技術尋找CSNl的卜未端相互作用蛋白扶得了5個候選蛋白

8、分別是PAD2、TSAl、elF_2家族蛋白、核糖體60s業(yè)基蛋E3L35以及個含c2結構域的蛋向，州對其中的PAD2、TSAI的相關功能進行了初步研究。PAD2是26S蛋白酶體的棱心組分20S蛋白酶體n勺Ⅱ亞基之一。已有證據(jù)揭示擬南芥中CSN復合體、26S蛋白酶體和SCF型黜連接酶能夠相互站臺形成更大的復臺體而日擬南芥SCF型E3可以通過Skpl亞基SnRK一蛋白激酶的直接相互作用錨定到PADl上。但日前關于CSN復合體通過何種方式參