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文檔簡(jiǎn)介
1、蘇云金芽胞桿菌菌株YBT-1765是從糧食倉(cāng)庫(kù)中分離得到的一株擬步行甲亞種(H<,8ab>)菌株。該菌株至少含有三個(gè)內(nèi)生質(zhì)粒,本文對(duì)其可檢測(cè)到的最大質(zhì)粒pBMB165的復(fù)制區(qū)和最小質(zhì)粒pBMB175的研究結(jié)果如下: 1.質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子的研究克隆并分析了包含質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子的一個(gè)20kb的DNA片段(GenBank登錄號(hào)為:DQ242517)。通過(guò)缺失實(shí)驗(yàn),將質(zhì)粒 pBMB165的復(fù)制子縮短到一個(gè)3.6kb的片段
2、上。同時(shí)證明,質(zhì)粒編碼的復(fù)制蛋白 Rep165 和兩個(gè)順式作用因子(復(fù)制起點(diǎn)ori165 和重復(fù)子 iterons 區(qū)域)為質(zhì)粒復(fù)制必需因子。還發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)重疊的開(kāi)放閱讀框:ORF6和ORF10,能參與控制質(zhì)粒穩(wěn)定性,為質(zhì)粒穩(wěn)定遺傳必需因子。這是首例報(bào)道的來(lái)源于擬步行甲亞種質(zhì)粒復(fù)制子。 通過(guò)序列分析,質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子與θ復(fù)制pAMβ1家族質(zhì)粒的復(fù)制子具有同源性,該質(zhì)粒也應(yīng)屬于pAMβ1質(zhì)粒家族。此外,芽胞桿菌群中pAMβ1
3、家族質(zhì)粒(pBMB165,pBT9727,pAW63和pXO2)復(fù)制區(qū)之間還表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)組成的相似性,但是與其它細(xì)菌中的pAMβ1家族質(zhì)粒復(fù)制子的結(jié)構(gòu)組成不同,表現(xiàn)出該家族質(zhì)粒復(fù)制子的遺傳可變性。 另一方面,在質(zhì)粒pBMB165復(fù)制子相鄰區(qū)域含有五個(gè)可能的轉(zhuǎn)座因子。其中,IS231U為一種新的IS231類(lèi)插入序列;根據(jù)序列的相似性,ISBth165、ISBth166和ISBth167分別屬于IS5、IS110和IS3家族轉(zhuǎn)座因子;
4、TnBMB165是一個(gè)不完整的Ⅱ型轉(zhuǎn)座子。這些轉(zhuǎn)座因子的存在,可能引起遺傳物質(zhì)的交換和重組,從而導(dǎo)致質(zhì)?;蛸|(zhì)粒復(fù)制子的進(jìn)化,為研究pAMβ1質(zhì)粒家族質(zhì)粒及其復(fù)制子的進(jìn)化提供了有用的遺傳信息。 2.菌株YBT-1765消除質(zhì)粒突變株的篩選將出發(fā)菌株YBT-1765采用逐級(jí)升溫培養(yǎng)以及十二烷基磺酸鈉(SDS)處理的方法,篩選得到兩株質(zhì)粒部分消除突變株,其中,突變株BMB193消除了YBT-1765中可檢測(cè)的最大質(zhì)粒pBMB165;突
5、變株BMB175則只含有出發(fā)菌株中的最小質(zhì)粒pBMB175。 3.質(zhì)粒pBMB175的克隆和分析克隆得到菌株YBT-1765中大小為14,841bp的最小質(zhì)粒pBMB175(GenBank 登錄號(hào)為:DQ364061)。序列分析表明,pBMB175含有18個(gè)ORFs(大于70個(gè)氨基酸)。其中,8個(gè)ORFs(編碼假定蛋白)與蘇云金亞種滾環(huán)復(fù)制質(zhì)粒pGI3的ORFs有不同程度的同源性。 通過(guò)缺失分析,將質(zhì)粒pBMB175復(fù)制
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