NMDA受體亞單位NR1在正常生后早期大鼠SVZ區(qū)神經干細胞上的超微分布.pdf

1、目的: 研究NMDA受體亞單位NR1在生后早期正常大鼠的腦室下區(qū)神經干細胞上的超微分布特點，為進一步研究NR1在生后早期大鼠SVZ區(qū)神經發(fā)生中的作用提供形態(tài)學依據。
　　 方法: 正常健康SD大鼠根據生后不同時期分為P7d、P14d、P21d、P28d四組，用含多聚甲醛、戊二醛和苦味酸的磷酸緩沖液（pH 7.4）沖灌固定，取腦，用同一固定液后固定，并做100μm振動切片，蔗糖浸泡，經液氮凍融處理后，室溫下兔血清封閉，用nesti

2、n 標記神經干細胞，1.4nm金標記NR1，用包埋前免疫電鏡技術，經系列脫水，置換，Epon812浸潤，做平板包埋，聚合后在光鏡下選取切片中免疫反應陽性部位，取材并粘貼于空白包埋塊上，做70nm超薄切片（ReichertNissei，Leica），經醋酸鈾、枸櫞酸鉛雙重染色，在日立H-600透射電子顯微鏡下觀察、拍照，并做圖像分析。
　　 結果:
　　 1、免疫過氧化物酶標電鏡方法顯示，P7d、P14d、P21d、P28

3、d正常大鼠SVZ區(qū)內均有nestin免疫反應陽性產物的黑色嗜鋨電子致密物出現，呈絮狀分布在SVZ區(qū)細胞的胞漿內。
　　 2、免疫納米金標電鏡方法顯示，P7d、P14d、P21d、P28d正常大鼠SVZ區(qū)內均有NR1免疫標記反應陽性物出現，呈黑色顆粒狀，分布在SVZ區(qū)細胞的胞膜上、核膜上和胞漿內，且在胞漿內的線粒體上偶見免疫金顆粒的存在。
　　 3、用免疫過氧化物酶標和免疫納米金標結合的免疫電鏡雙標方法顯示，P7d、P14

4、d、P21d、P28d正常大鼠SVZ區(qū)內均有nestin免疫反應陽性產物和NR1免疫標記反應陽性物出現。Nestin免疫反應陽性物呈絮狀分布在神經干細胞的胞漿內，NR1免疫反應陽性物呈黑色顆粒狀彌散分布在神經干細胞和室管膜細胞的胞膜上、核膜上和胞漿內，并在神經干細胞的胞漿內可見有免疫過氧化物酶標記物與免疫金顆粒的共存。
　　 結論:
　　 通過nestin標記神經干細胞的免疫過氧化物酶標和1.4nm金標記NR1的免疫納米