針藥結合誘導骨髓間充質干細胞定向分化為軟骨細胞的實驗研究.pdf

1、目的：觀察針藥結合對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質干細胞增殖及糖胺聚糖含量、Ⅱ型膠原表達的影響，以探討針藥結合對大鼠骨髓間充質干細胞向軟骨細胞轉化的定向誘導作用和輔助改善作用。
　　 方法：取20只SD大鼠，電針針刺7天，頸總動脈取血制備血清。另取30只4周齡SD大鼠骨髓中分離骨髓間充質干細胞，體外傳代培養(yǎng)，取第3代骨髓間充質干細胞分為對照組、針刺血清組、丹參注射液組及針藥組，通過不同條件誘導骨髓間充質干細胞向軟骨細胞分化。倒置顯微鏡

2、下觀察原代培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞形態(tài)變化，運用MTT法觀察各組對骨髓間充質干細胞增殖的影響，采用阿利新藍法計算各組培養(yǎng)液內糖胺聚糖(GAG)含量并比較各組之間分泌GAG的不同，運用免疫組織化學染色方法檢測各組中軟骨細胞Ⅱ型膠原表達的影響。
　　 結果：①剛分離接種的細胞鏡下呈圓形，大小不一，數(shù)目較多，隨著培養(yǎng)時間的延長，貼壁細胞聚集生長，呈集落狀態(tài)，細胞形態(tài)為典型梭形細胞。原代培養(yǎng)約6-7d左右，細胞融合成單層，細胞梭形突起變長

3、，排列有明顯方向性。培養(yǎng)約10d左右，細胞融合約80％。傳代后生長更加迅速，傳代細胞呈均一長梭形、多角形、短梭形，緊密排列似旋渦狀。②與對照組相比，丹參注射液及針藥結合均能夠促進骨髓間充質干細胞的增殖(P＜0.05)，針藥組作用更明顯(P＜0.01)；針刺血清不能促進骨髓間充質干細胞的增殖（P＞0.05）。③丹參注射液組及針藥結合組培養(yǎng)液GAG的含量與對照組GAG的含量相比有明顯升高(P＜0.05)，針藥組更為明顯(P＜0.01)；針刺

4、血清則不能提高培養(yǎng)液GAG的含量（P＞0.05）。④免疫組織化學染色Ⅱ型膠原陽性表達為棕黃色染色，主要定位于細胞外基質，丹參組和針藥組均有Ⅱ型膠原表達，針藥組比丹參組表達強；針刺組和對照組沒有Ⅱ型膠原表達。結果表明針藥組可以有效的促進Ⅱ型膠原表達，較丹參組效果好，針刺組并不能促進Ⅱ型膠原的表達。
　　 結論：復方丹參注射液和針藥結合的方法均能夠促進骨髓間充質干細胞的增殖，并能夠誘導骨髓間充質干細胞分化為軟骨細胞，針刺血清沒有這種