麻瘋樹核糖體失活蛋白（curcin）的化學修飾與光譜學研究.pdf

1、核糖體失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein，簡稱RIPs)是一類rRNAN-糖苷酶(EC 3.2．2.22)，可專一水解大鼠28S rRNA的A4324位的N—C糖苷鍵，使核糖體失活從而抑制蛋白質的合成。根據(jù)RIPs一級結構的特征，可將其分成三類。其中I型RIPs最主要的一個生理生化特征就是對無細胞體系的蛋白質合成具有強烈抑制作用，該類蛋白生化性質穩(wěn)定，制備簡便，可與單克隆抗體等制備免疫毒素，在腫瘤治療和

2、骨髓移植等方面具有廣泛應運前景。本實驗室從四川麻瘋樹種仁中分離純化得到一種I型RIPs(curcin)。目前對curcin的基因克隆及序列分析已經(jīng)作了大量工作，但對curcin的高級結構還知之甚少。因此本文在前人研究的基礎上利用特異性的化學修飾劑對curcin五種氨基酸進行化學修飾，以其得到與curcin核糖體失活活性相關的結構信息。 麻瘋樹核糖體失活蛋白(curcin)經(jīng)勻漿、浸取、硫酸銨分級沉淀得粗品，將粗品于Scphade

3、x G-100分子篩層析得純品，經(jīng)SDS-PAGE檢測為單一蛋白帶。通過無細胞體系蛋白合成抑制活性的測定，結合熒光光譜和圓二色譜技術，對麻瘋樹核糖體失活蛋白(CUFCin)部分氨基酸殘基進行特異性化學修飾，探討維持curcin活性的必需氨基酸基團及修飾對curcin結構的影響。結果表明，組氨酸和半胱氨酸的化學修飾對curcin活性沒有影響。色氨酸和賴氨酸的修飾結果表明對這兩種氨基酸的修飾表現(xiàn)了剩余活性對修飾劑濃度和修飾時間的依賴性，隨著

4、修飾時間的延長和修飾劑濃度的增大，curcin失活程度增大。最終活性分別下降了50％和100％，表明其為維持curcin活性的重要殘基。280 nm處的發(fā)射光譜最大發(fā)射波長發(fā)生紅移，表明對這兩種殘基的修飾影響了色氨酸的微環(huán)境。精氨酸修飾也表現(xiàn)出了對修飾時間和修飾劑濃度的依賴性，最終curcin的抑制活性完全喪失，內源熒光強度下降，最大發(fā)射波長發(fā)生紅移，CD譜發(fā)生顯著變化。表明精氨酸是維持clarcin活性的必需殘基，并且對空間結構影響較