2,4-噻唑烷二酮對MPP+損傷SH-SY5Y細胞的保護作用.pdf

1、帕金森病是常見的神經退行性疾病，主要損害患者的運動機能，此外對執(zhí)行力、注意力、記憶及語言功能的影響貫穿病程始終，嚴重影響患者的生活質量。中腦黑質部位多巴胺能神經元的變性缺失是帕金森病的主要病理特征。至今，帕金森病的發(fā)病機制尚不完全清楚，可能與氧化應激、線粒體功能障礙、基因突變、免疫炎癥反應、毒性物質等有關，并且認為細胞凋亡是導致多巴胺能神經元缺失的共同途徑。線粒體在細胞凋亡途徑中有重要作用，因此從線粒體入手，增加線粒體的生物發(fā)生，改善線

2、粒體功能，減少自由基的生成以抵抗多巴胺能神經元的凋亡，將是治療帕金森病的一個有效靶點。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptorgamma, PPARγ)是核受體，其信號通路的激活可通過增強線粒體的合成和代謝、抗細胞炎癥、抗氧化應激、抗凋亡等機制對中樞神經系統(tǒng)神經元起到保護作用。2，4-噻唑烷二酮是PPARγ受體的激動劑，可以有效的激活PPARγ信號通路。已有研究表

3、明，PPARγ噻唑烷二酮類配體激動劑可以明顯改善MPTP損傷的帕金森病小鼠癥狀，對多巴胺能神經元起到保護作用。但在帕金森病體外細胞模型中的作用還有待研究。
　　本文通過神經毒性物質MPP+損傷人神經母細胞瘤細胞株SH-SY5Y細胞這一經典方法復制帕金森病體外細胞模型，通過MTS比色法、Hoechst33342染色法、FJC染色法、Western Blot等方法探究2，4-噻唑烷二酮作為PPARγ的激動劑對MPP+損傷SH-SY5Y

4、細胞的作用，探討2，4-噻唑烷二酮能否通過調節(jié)PPARγ輔激活因子PGC-1α以及下游信號蛋白的表達，改善線粒體功能減少細胞凋亡起到神經保護作用。研究表明：⑴MPP+濃度為1 mmβl/L、作用24 h時，SH-SY5Y細胞存活率降至48％，成功復制了MPP+誘導的帕金森病體外細胞模型。⑵2，4-噻唑烷二酮單獨作用于SH-SY5Y細胞，對細胞存活率沒有影響。⑶用MTS比色法檢測2，4-噻唑烷二酮對MPP+損傷SH-SY5Y細胞存活率的影

5、響發(fā)現，0.01、0.1、1、10μmol/L2，4-噻唑烷二酮4個干預組均可顯著提高MPP+損傷細胞的存活率(P＜0.05)，并且前3個低濃度組的干預效果極顯著地(P＜0.01)好于10μmol/L組。⑷以Hoechst33342、FJC染色法檢測2，4-噻唑烷二酮對MPP+損傷SH-SY5Y細胞凋亡率的影響發(fā)現，0.01、0.1、1、10μmol/L2，4-噻唑烷二酮4個干預組均可極顯著地降低MPP+損傷細胞的凋亡率(P＜0.01)

6、，并且前3個低濃度組的干預效果好于10μmol/L組。⑸通過Western Blot方法檢測線粒體功能相關蛋白(PGC-1α、NRF1、NRF2)的表達變化發(fā)現，0.1、1μmol/L2，4-噻唑烷二酮干預組中PGC-1α蛋白的表達量較MPP+單純損傷組顯著增加(P＜0.05);0.01、0.1、1μmol/L2，4-噻唑烷二酮干預組中NRF1、NRF2蛋白的表達量較MPP+單純損傷組顯著增加。⑹用Western Blot方法檢測線粒體

7、分裂融合相關蛋白(Fis1、Mfn2)的表達變化發(fā)現，MPP+損傷后Fis1/Mfn2蛋白表達的比例顯著增加，0.01、0.1μmol/L2，4-噻唑烷二酮干預組Fis1/Mfn2蛋白表達的比例下降，1、10μmol/L2，4-噻唑烷二酮干預組Fis1/Mfn2蛋白表達量又明顯增加。⑺Western Blot檢測細胞凋亡與存活蛋白(Bax、Bcl-2、ERK1/2)的結果顯示，0.01、0.1μmol/L2，4-噻唑烷二酮干預組的Bax