地佐辛對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角NMDA-2B受體表達的影響.pdf

1、目的：糖尿病周圍神經(jīng)病變(diabetic peripheral neuropathy，DPN)疼痛屬于神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain，NP)的一種類型，DPN是糖尿病常見的并發(fā)癥之一，在糖尿病患者中的發(fā)病率約為7.5％-24％。DPN的發(fā)病機制是非常復雜的，中樞敏化在DPN的產(chǎn)生和維持中起到了重要的作用，而興奮性神經(jīng)遞質谷氨酸及其受體NMDA參與了中樞敏化的發(fā)生。NMDA-2B作為NMDA受體的一個亞基，對傷害性信號

2、的傳遞尤其重要，因此，近年來的對NMDA受體的研究重點放在NMDA-2B亞基上。
　　地佐辛作為新型人工合成強效的混合型阿片受體激動-拮抗劑，其特點是鎮(zhèn)痛作用強而不良反應低，已在臨床廣泛應用。研究發(fā)現(xiàn)弱阿片受體激動劑曲馬多對DPN疼痛治療是有效的，而地佐辛對DPN的療效目前并不十分清楚，本實驗通過腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)，制備糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型，然后給予地佐辛進行干預治療。通過觀察正常組(Normal組)、糖尿病神經(jīng)

3、病理性疼痛組(Control組)以及糖尿病神經(jīng)病理性疼痛模型制備成功后地佐辛干預組(Dezocine組)三組大鼠的體重、空腹血糖和50％縮足反應閾值(PWT)的變化，采用免疫組織化學染色技術以及RT-PCR技術，比較正常大鼠、糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠以及地佐辛干預的糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的脊髓背角NMDA-2B受體的表達變化，從而探討地佐辛對糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠疼痛的影響及其可能的作用機制。
　　方法：健康成年雄性SD大鼠8

4、0只，體重130g～150g，由河北醫(yī)科大學動物實驗中心提供。模型的制備：隨機選擇60只大鼠腹腔注射STZ(50mg/kg)，注射STZ一周以后，有45只大鼠的空腹血糖>16.7mol/L(成功率為75％)，達到合格的標準。注射STZ兩周后，用von Frey Hairs測定實驗大鼠的PWT，PWT小于4g為合格的神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型。剩余的20只大鼠作為正常對照大鼠組，用同等體積的生理鹽水代替STZ腹腔注射。
　　取糖尿病神經(jīng)

5、病理性疼痛大鼠36只，隨機分為2組，每組18只：一組為地佐辛組(Dezocine組)，于注射STZ后第2周開始大鼠大腿外側肌肉注射地佐辛2.52mg/kg，每日一次，連續(xù)肌肉注射1周；一組為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠組(Control組)，用同等體積的生理鹽水代替地佐辛，方法同前；取正常大鼠18組，作為正常組(Normal組)，用同等體積的生理鹽水代替地佐辛，方法同前。分別于注射STZ前(T0)、注射后第2周(T1)、第3周(T2)、第5

6、周(T3)、第7周(T4)5個時間點測量各組大鼠的體重、空腹血糖、PWT，于T2、T3、T4時間點三組分別隨機抽取6只大鼠取材。其中3只大鼠用于免疫組織化學染色技術，麻醉后用4％的多聚甲醛液灌流固定后，取大鼠胸腰段膨大處的脊髓標本制作成蠟塊，進行免疫組織化學染色，測定大鼠脊髓背角NMDA-2B受體的免疫陽性神經(jīng)細胞數(shù)；另外3只大鼠麻醉后快速在提取大鼠胸腰段膨大處脊髓組織，利用PT-PCR技術半定量測定NMDA-2B受體的mRNA含量。<

7、br>　　采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料均以平均數(shù)±標準差(x-±s)表示，組內比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.三組大鼠在體重、空腹血糖、50％縮足反應閾值方面的變化比較：注射STZ前，三組大鼠體重、空腹血糖、PWT差異無統(tǒng)計學意義；注射STZ后，Dezocine組和Control組大鼠體重顯著降低、空腹血糖明顯升高、PWT顯著降低(P<0

8、.05)。注射地佐辛后，與Control組相比，地佐辛組大鼠PWT在T2時間點顯著升高(P<0.05)，在T3、T4時間點無明顯差異(P>0.05)；Control組和Dezocine組兩組大鼠的體重、空腹血糖在各時間點均無明顯差異(P>0.05)。
　　2.三組大鼠脊髓背角NMDA-2B受體的表達變化比較：與Normal組相比，Dezocine組和Control組兩組大鼠NMDA-2B受體免疫陽性神經(jīng)元細胞數(shù)量、mRNA含量在T

9、2、T3、T4時間點顯著升高(P<0.05)，與Control組大鼠相比，Dezocine組大鼠NMDA-2B受體免疫陽性神經(jīng)元細胞數(shù)量、mRNA含量在T2時間點顯著降低(P<0.05)，在T3、T4差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在Dezocine組內NMDA-2B受體免疫陽性神經(jīng)元細胞數(shù)量、mRNA含量T3時間點與T2比較顯著升高(P<0.05)。
　　結論：地佐辛可以有效緩解糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠的病理性痛；地佐辛可以抑