受精卵胞質(zhì)注射法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因兔的初步研究.pdf

1、本研究通過探討受精卵胞質(zhì)注射法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因兔的相關(guān)影響因素,為建立受精卵胞質(zhì)注射法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)平臺奠定基礎(chǔ)。
　　 一、探討了家兔體重和不同來源FSH對其超數(shù)排卵效果的影響。結(jié)果顯示,體重超過3kg母兔進行超排,卵巢上的平均排卵點與回收的平均胚胎數(shù)(42.06±7.30,40.56±7.2),均顯著高于體重2.5kg～3.0kg組(24.13±6.37,25.75±6.50)(P＜0.05)和體重小于2.5kg組(9.71

2、±4.86,8.86±4.56)(P＜0.01);用中國科學(xué)院動物所生產(chǎn)的FSH對母兔進行超排處理,卵巢上的平均排卵點和回收的平均胚胎(42.79±8.38,40.63±8.29)顯著高于日本進口FSH組(30.35±9.99,29.27±9.62)(P＜0.05),與寧波制品廠的FSH組(21.63±8.34,19.67±8.62)比較差異極顯著(P＜0.01)。
　　 二、對受精卵胞質(zhì)注射法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因兔的相關(guān)影響因素進行了研

3、究,通過比較兔受精卵胞質(zhì)注射不同體積和濃度的FAT-1質(zhì)粒DNA及胚齡對胚胎發(fā)育潛力以及轉(zhuǎn)基因效果的影響,以探討受精卵胞質(zhì)注射法生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因兔的可行性。結(jié)果顯示:注射FAT-1質(zhì)粒DNA體積40pL組,其受精卵的卵裂率、桑椹胚率、囊胚率以及囊胚陽性率都顯著高于50pL(P＜0.05)和60pL組(P＜0.01),但與對照組相比,受精卵的卵裂率、桑椹胚率和囊胚率差異不顯著(P＞0.05);當(dāng)兔受精卵胞質(zhì)注射FAT-1質(zhì)粒DNA濃度為60ng

4、/μL時,囊胚陽性率(64.58％)顯著的高于75ng/μL組(28.57％)(P＜0.05),與30、45ng/μL(0和10.20％)比較差異極顯著(P＜0.01);供體兔注射HCG后16h回收的兔受精卵進行胞質(zhì)注射后,囊胚的陽性率(68.63％)顯著高于18h組(44.90％)(P＜0.05),極顯著高于20h組(9.68％)(P＜0.01);而且16h組的分裂率、桑椹胚率和囊胚率顯著高于20h組(P＜0.05)。將受精卵胞質(zhì)注射

5、法生產(chǎn)的286枚轉(zhuǎn)基因胚胎分別移入11只同期發(fā)情的受體母兔,結(jié)果有2只受體母兔懷孕。其中一只母兔在妊娠到24天時流產(chǎn),另外一只母兔懷孕28天后產(chǎn)下2只仔兔,經(jīng)PCR、RT-PCR、Western blot檢測以及冷凍切片觀察,證明所生兩只仔兔均攜帶有外源基因。
　　 以上結(jié)果表明:(1)供體母兔體重和FSH來源均對家兔的超排效果有顯著影響,應(yīng)選用中國科學(xué)院動物所的FSH對3kg以上的母兔進行超排處理,以獲得理想的超排效果;(2)