稀有鮈鯽TLR通路響應因子在4種污染物免疫毒性檢測中的作用.pdf

1、隨著水環(huán)境污染問題的日益嚴峻，水環(huán)境中存在大量污染物和致病菌，這些物質(zhì)對水生生物存在潛在的危害。免疫系統(tǒng)是機體防御的第一道防線，而Toll-like受體(Toll-like receptor，TLR)信號通路是激活機體免疫響應的關鍵通路，其在保護機體免受外源致病菌的侵害中發(fā)揮重要作用。稀有鮈鯽作為本土生物在水生態(tài)毒理研究中發(fā)揮越來越重要的作用，而對稀有鮈鯽免疫毒性效應相關研究很少;為了進一步對稀有鮈鯽參與免疫響應重要基因的挖掘和探究其在

2、免疫響應中發(fā)揮的免疫毒性監(jiān)測作用，本實驗首先克隆了稀有鮈鯽免疫響應TLR信號通路中5個免疫響應因子序列并進行測序、分析，檢測其在各組織中的基礎表達;為了評價水環(huán)境污染物對稀有鮈鯽的免疫毒性效應，選用了典型農(nóng)藥（毒死蜱（Chlorpyrifos，CPF）、阿維菌素(Avermectin，AVM))和重金屬(銅(Cu2+)、鎘(Cd2+))污染物在環(huán)境相關濃度下暴露稀有鮈鯽，利用定量PCR(Quantitative Polymerase C

3、hain Reaction)檢測這5個基因和通路中其它調(diào)控因子基因的表達情況，采用ELISA檢測稀有鮈鯽生理生化參數(shù)的變化;為了探究污染物的存在對機體抵抗外源致病菌的能力的影響，對經(jīng)毒死蜱、阿維菌素、Cu2+和Cd2+暴露的稀有鮈鯽進行腹腔注射感染致病菌，48h后從基因水平和生理生化水平上評估污染物暴露對稀有鮈鯽宿主抵抗能力的影響，主要實驗結果如下:
　　1.稀有鮈鯽TLR通路免疫響應因子髓樣細胞分化因子88（myd88，白細胞介

4、素1受體相關蛋白激酶（irak-1)，干擾素調(diào)控因子5（irf5），干擾素調(diào)控因子7(irf7)和白細胞介素8(il-8)的克隆，進化樹分析，氨基酸結構域分析及各組織中的基礎表達結果顯示:稀有鮈鯽這5個基因與其它鯉科魚類具有較高的同源性;il-8，irak-1，irf5，irf7和myd88基因與斑馬魚的相似性分別為47.5％，79％，89.8％，81.2％和91.2％;這些基因具有類似發(fā)揮免疫功能的結構域;基礎表達在免疫器官脾臟、腎臟

5、中呈現(xiàn)較高水平表達表明5個基因存在組織功能特異性。
　　2.CPF和AVM暴露稀有鮈鯽及后續(xù)細菌感染實驗表明，CPF和AVM都能影響tlr3和tlr5介導的免疫響應信號通路相關基因表達和改變免疫響應生理生化參數(shù)(Immunoglobulin M，IgM)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)、C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)、補體C3(Complement3，C3)和溶菌酶(Ly

6、sozyme，Lys)的含量，通過影響稀有鮈鯽免疫反應的信號傳遞過程和免疫參數(shù)因子在免疫反應中發(fā)揮正常的功能，從而對稀有鮈鯽產(chǎn)生一定免疫毒性效應。CPF暴露及后續(xù)的細菌感染中被抑制的TLR通路調(diào)控基因表達和免疫因子的含量證明與AVM暴露相比較，CPF暴露對稀有鮈鯽的免疫毒性效應更強，能顯著降低稀有鮈鯽的宿主抵抗能力。
　　3.Cu2+和Cd2+暴露結果表明環(huán)境相關濃度Cu2+和Cd2+暴露能通過誘導稀有鮈鯽tlr3和tlr5介導的