酪氨酸磷酸酶Shp2在小鼠樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的過敏性哮喘中的作用研究.pdf

1、哮喘是一種慢性小氣道炎癥疾病，屬于Ⅰ型超敏反應(yīng)。哮喘的主要病理特征包括氣道高反應(yīng)性，以嗜酸性粒細(xì)胞浸潤為主的炎癥、杯狀細(xì)胞化生及黏液過度分泌等。目前缺乏安全治愈哮喘的有效藥物，解析哮喘的發(fā)病機制及其調(diào)控過程對于哮喘新型診療方案制定具有重要意義。
　　樹突狀細(xì)胞(DC)是功能最強的抗原遞呈細(xì)胞，被視為連接固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。當(dāng)外界抗原進入氣道時，首先由DC識別并將抗原吞噬加工處理，在加工處理的同時也會向附近的淋巴結(jié)遷移，DC

2、在遷移的過程中不斷成熟，在淋巴結(jié)中促使Naive T細(xì)胞分化為Th2型細(xì)胞，Th2型細(xì)胞進一步激活B細(xì)胞使其產(chǎn)生大量IgE抗體吸附于肥大細(xì)胞表面，當(dāng)外界相同的抗原再次入侵機體，抗原與IgE抗體結(jié)合，引起肥大細(xì)胞活化，分泌大量活性介質(zhì)，導(dǎo)致氣道痙攣和氣道炎癥。
　　蛋白磷酸酶與激酶介導(dǎo)的可逆磷酸化調(diào)控是細(xì)胞信號傳遞中最廣泛、最普遍的調(diào)控方式。Shp2由PTPN11基因編碼，是一種廣泛表達的非受體型酪氨酸磷酸酶，參與了炎癥反應(yīng)、腫瘤的

3、發(fā)生和免疫調(diào)節(jié)等許多重要的病理生理過程。而對于哮喘的關(guān)鍵起始過程的調(diào)控并無報道。前期研究發(fā)現(xiàn)Shp2可以參與肺上皮損傷及肺部炎癥調(diào)控，這提示了Shp2在調(diào)控肺部損傷中的重要作用。目前關(guān)于Shp2對過敏性哮喘影響的研究主要集中在炎癥發(fā)生的后期，包括維持IL-5誘導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞的存活以及正向調(diào)控氣道上皮細(xì)胞TGF-β的產(chǎn)生從而影響哮喘后期的氣道重構(gòu)。最近的一項研究發(fā)現(xiàn)Shp2通過C型凝集素受體通路介導(dǎo)了DC抵抗白色念珠菌感染的過程。這提示

4、我們Shp2在DC介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中具有重要作用。
　　本項研究中，我們首先構(gòu)建了DC特異性敲除Shp2的小鼠(Cd11c-CreShp2Fox/Flox)在無外界壓力情況下敲除組小鼠與對照組在肺組織結(jié)構(gòu)、白細(xì)胞分類計數(shù)等方面沒有明顯差異。其次我們利用HDM及OVA分別誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生過敏性哮喘，結(jié)果顯示DC中缺失Shp2可以緩解由過敏原引起的哮喘。在哮喘的發(fā)病進程中，DC的吞噬、成熟、遷移以及抗原遞呈都起到了非常重要的作用，因此我們對

5、DC的各項功能分別做了檢測。我們用OVA偶聯(lián)Alexa-Flour647的熒光染料與小鼠骨髓誘導(dǎo)分化的DC共孵育檢測其對抗原的吞噬能力，結(jié)果顯示Shp2缺失并不影響DC的吞噬。接著，我們對DC表面標(biāo)記Cd11c以及與其成熟相關(guān)的共刺激分子CD80、CD86進行流式檢測。檢測發(fā)現(xiàn)Shp2缺失對于DC共刺激分子CD80、CD86的表達量沒有影響。下一步我們利用Transwell小室對DC的遷移進行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Shp2缺失可以明顯抑制DC