水蛭素對人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞作用的實驗研究.pdf

1、增生性瘢痕(hypertrophic-scar，HS)是創(chuàng)傷后，尤其是深度燒傷后最常見的一種病理性愈合現(xiàn)象。其本質(zhì)是成纖維細(xì)胞(fibroblast，F(xiàn)B)的異常增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積。在當(dāng)今，盡管對增生性癱痕的發(fā)病機(jī)制和治療手段進(jìn)行了大量的研究，但目前仍沒有理想的結(jié)果。因此尋求有效防治增生性瘢痕的方法是創(chuàng)傷修復(fù)領(lǐng)域的重要課題。經(jīng)研究表明，水蛭素具有抑制器官纖維化、抗炎等作用。本實驗對體外培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細(xì)胞(hypertro

2、phic scar fibroblast，HSFb)進(jìn)行了以下實驗內(nèi)容，深入研究了水蛭素對HSFb的抑制作用，探討水蛭素對HS的作用方式和機(jī)制，為臨床治療HS提供理論依據(jù)。
　　 目的：研究水蛭素誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡的作用及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：分離培養(yǎng)HSFb，取4-7代細(xì)胞，實驗組水蛭素濃度為1u/mL、0.5u/mL、0.25u/mL、0.125u/mL，對照組選擇完全培養(yǎng)基處理，觀察藥物對細(xì)

3、胞的影響。檢測指標(biāo)：1.倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；2.MTT法檢測細(xì)胞活力及細(xì)胞計數(shù)；3.免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測HSFb中bax和bcl-2的表達(dá)；4Westernblot法檢測bax和bcl-2的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT比色結(jié)果顯示水蛭素作用于HSFb的增殖呈現(xiàn)出明顯的抑制趨勢，且和藥物濃度呈相關(guān)性。
　　 2.水蛭素處理后細(xì)胞凋亡率增加，和對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 3.免疫

4、組化實驗圖形分析軟件分析結(jié)果表明，和對照組相比，水蛭素干預(yù)組bax表達(dá)增加，bcl-2表達(dá)下降。
　　 4.Westernblot法檢測和對照組相比，水蛭素干預(yù)組bax表達(dá)增加，bcl-2表達(dá)下降。
　　 結(jié)論：本實驗通過對體外培養(yǎng)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞不同指標(biāo)的檢測，證實水蛭素對人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞有顯著的抑制作用，其抑制作用可能與以下幾個方面有關(guān)：
　　 1.水蛭素可改變細(xì)胞形態(tài)；
　　 2.水蛭素