小鵝瘟單克隆抗體的制備及其鑒定.pdf

1、小鵝瘟(Gosling Plague，GP)又稱鵝細(xì)小病毒病，最早的時(shí)候是由我國(guó)教授方定—于1956年發(fā)現(xiàn)并用鵝胚分離到小鵝瘟病毒(Goose Parvovirus，GPV)。此病主要是導(dǎo)致30日齡內(nèi)的雛鵝與雛番鴨感染發(fā)病，雛鵝在10日齡的發(fā)病和死亡率能達(dá)到100％，此病是一種傳播速度極快和死亡率很高的烈性傳染病。小鵝瘟的診斷是目前學(xué)者們普遍關(guān)注的問(wèn)題，并且這一問(wèn)題直接關(guān)系養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展。
　　 本試驗(yàn)純化了GPV病毒并且對(duì)目的基

2、因片段VP3進(jìn)行了擴(kuò)增、克隆和鑒定，同時(shí)將所得序列與已發(fā)表GPV的VP3序列的同源性進(jìn)行了比較，結(jié)果同源性在95.8％-99.5％之間，說(shuō)明所克隆片段是所需要的目的片段。
　　 本試驗(yàn)繼續(xù)用純化的GPV病毒當(dāng)做抗原對(duì)BALB/C小鼠進(jìn)行免疫并借此建立出間接ELISA方法用來(lái)對(duì)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行篩選，在經(jīng)過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)后確定了用來(lái)進(jìn)行間接ELISA篩選方法的最佳反應(yīng)條件，即用純化的GPV當(dāng)做抗原以1∶1600稀釋，包被過(guò)夜在4℃，

3、陰陽(yáng)性對(duì)照分別采用1∶200稀釋陰、陽(yáng)性血清，以37℃1h為反應(yīng)條件最好，酶標(biāo)二抗以1∶2000作為工作濃度稀釋。取免疫BALB/C小鼠的脾臟與培養(yǎng)的骨髓瘤細(xì)胞做融合，用建立成功的間接ELISA方法對(duì)融合成功的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選檢測(cè)，經(jīng)過(guò)初檢、二檢和三檢共獲得6株陽(yáng)性雜交瘤的細(xì)胞株，又用有限稀釋法對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞株進(jìn)行了3-4次的亞克隆（其中最少兩次是單克?。┖螳@得了2株能穩(wěn)定的分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，將其分別命名為5F11、3C11。