心衰模型中冠狀動脈平滑肌細胞鈣異常的研究.pdf

1、目的：
　　研究心衰個體中冠狀動脈平滑肌細胞鈣清除異常及ROS水平。
　　方法：
　　1.30只成年雄性SD大鼠，體重250g左右，隨機分為：假手術組（n=10），心衰組（n=20)，心衰組行左冠狀動脈前降支結(jié)扎來建立心衰模型，假手術組為同期開胸但不結(jié)扎。建模12周后，隨機選10只心衰組大鼠，分別取其缺血區(qū)及非缺血區(qū)的冠狀動脈血管。
　　2.采用木瓜蛋白酶和Ⅱ型膠原酶兩步酶消化法獲取單個冠狀動脈平滑肌細胞。

2、>　　3.用免疫熒光法對冠狀動脈平滑肌細胞進行鑒定。
　　4.采用流式細胞術測各組冠狀動脈平滑肌細胞內(nèi)游離鈣離子濃度和ROS水平。
　　5.利用Western blot法測細胞內(nèi)p47phox、p-p47phox、SERCA及NCX蛋白的表達水平。
　　6.采用Real-time qRT-PCR檢測p47phox、SERCA及NCX在mRNA水平上的改變。結(jié)果：
　　1.免疫熒光染色法鑒定分離所得細胞為平滑肌細胞

3、。
　　2.心衰組（缺血區(qū)）及心衰組（非缺血區(qū)）的鈣離子水平、ROS水平均較假手術組明顯增高（P<0.01），兩心衰組相比，鈣離子水平及ROS水平均無明顯差異（P>0.05）。
　　3.與假手術組相比，心衰組（缺血區(qū)）及心衰組（非缺血區(qū)）p47phox、p-p47phox表達明顯增加（P<0.05）；心衰組（缺血區(qū)）及心衰組（非缺血區(qū)）NCX表達較假手術組顯著增加（P<0.01）；心衰組（缺血區(qū)）及心衰組（非缺血區(qū)）SERC

4、A表達較假手術組顯著減少（P<0.01）。兩心衰組相比，p47phox、p-p47phox、NCX及SERCA表達無明顯差異（P>0.05）。
　　4.與假手術組相比，心衰組（缺血區(qū)）及心衰組（非缺血區(qū)）的p47phox、NCX的mRNA表達明顯上調(diào)（P<0.01）；心衰組（缺血區(qū)）及心衰組（非缺血區(qū)）SERCA的mRNA表達明顯下調(diào)（P<0.01）。兩心衰組相比，p47phox、NCX及SERCA的mRNA表達無明顯差異（P>0

5、.05）。
　　結(jié)論：
　　1.心衰時冠狀動脈血管（缺血區(qū)及非缺血區(qū)）的平滑肌細胞內(nèi)鈣離子濃度均升高，血管舒張功能障礙，血管發(fā)生痙攣，導致心衰。
　　2.心衰時冠狀動脈血管（缺血區(qū)及非缺血區(qū)）的平滑肌細胞內(nèi)ROS水平上調(diào)，血管硬度增加，導致心衰。
　　3.心衰時NCX表達增多，SERCA表達減少，導致平滑肌細胞內(nèi)鈣清除異常。
　　4.心衰時p47phox發(fā)生磷酸化，p47表達增加，使平滑肌細胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增