酶解魷魚(yú)內(nèi)臟制備功能性短肽的研究.pdf

1、本文以水解度、氮收率為指標(biāo)，研究酶解魷魚(yú)內(nèi)臟制備短肽的最佳反應(yīng)條件，并對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行分析研究，研究酶解后產(chǎn)物的抗氧化活性、短肽的鏈長(zhǎng)，以及短肽分子量的大??；在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原理，以及響應(yīng)面分析方法，模擬得到二次多項(xiàng)式回歸方程的預(yù)測(cè)模型。最終得出溫度、PH、加酶量、反應(yīng)時(shí)間4種反應(yīng)條件對(duì)酶解程度的影響；具體試驗(yàn)情況如下：
　　1.試驗(yàn)選取堿性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、動(dòng)物蛋白酶、中性蛋白酶

2、、風(fēng)味蛋白酶對(duì)魷魚(yú)內(nèi)臟進(jìn)行水解，通過(guò)測(cè)定水解液的總氮含量、氨基態(tài)氮含量，比較各水解液的水解度及水解得率，選取較優(yōu)的蛋白酶-胰蛋白酶。經(jīng)大孔樹(shù)脂對(duì)胰蛋白酶水解液進(jìn)行水、20％、60%、80%甲醇-水梯度洗脫，經(jīng)液相質(zhì)譜(LC-MS)進(jìn)行分析，可以得知水解液短肽分子量范圍在200～2400，其中以60%梯度洗脫的水解分子量分布范圍較為集中，且以分子量在200左右的化合物為主，對(duì)各洗脫梯度水解液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由

3、基清除能力分析可知60%梯度洗脫水解液DPPH清除能力為40.21%。結(jié)論：胰蛋白酶為水解魷魚(yú)內(nèi)臟較優(yōu)的蛋白酶，且60%甲醇-水為最優(yōu)洗脫濃度。
　　2.以魷魚(yú)內(nèi)臟為研究對(duì)象，選用水解度和氮收率作為衡量魷魚(yú)內(nèi)臟酶解工藝的指標(biāo)，在單因素基礎(chǔ)上，選用pH、酶解溫度、酶解時(shí)間、酶添加量等作為自變量，在pH為8.0時(shí)，水解效果最佳，溫度達(dá)到45℃時(shí)，水解度和氮收率均達(dá)到最大值，酶解時(shí)間為4h時(shí)，魷魚(yú)內(nèi)臟的酶解效果最佳，當(dāng)酶添加量為0.3%

4、時(shí)，魷魚(yú)內(nèi)臟蛋白酶解較為充分為節(jié)約生產(chǎn)成本，并結(jié)合兩評(píng)價(jià)指標(biāo)該加酶量最佳酶添加量，水解后的肽鏈長(zhǎng)度與水解度有密切的的關(guān)系，氮收率決定了水解程度，兩個(gè)指標(biāo)相結(jié)合，在達(dá)到兩個(gè)指標(biāo)都最優(yōu)的時(shí)候，既保證短肽的長(zhǎng)度，又保證了水解得率，單因素水平上pH、酶解溫度、酶解時(shí)間、酶添加量的較優(yōu)添加量的確定為響應(yīng)面分析方法奠定了基礎(chǔ)，更好的確定了研究水平。
　　3.以魷魚(yú)內(nèi)臟為研究對(duì)象，選用水解度和氮收率作為衡量魷魚(yú)內(nèi)臟酶解工藝的指標(biāo)，首先篩選出胰蛋

5、白酶最有利于魷魚(yú)內(nèi)臟的酶解。在單因素基礎(chǔ)上，選用pH、酶解溫度、酶解時(shí)間、酶添加量等作為自變量，以水解度作為響應(yīng)值，利用Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)原理，以及響應(yīng)面分析方法，模擬得到二次多項(xiàng)式回歸方程的預(yù)測(cè)模型。根據(jù)該模型并結(jié)合實(shí)際，確定魷魚(yú)內(nèi)臟酶解的最佳工藝條件為pH8.0，酶解溫度43℃，酶解時(shí)間4.0h，酶添加量0.27%，預(yù)測(cè)響應(yīng)值為72.62%。在此條件下，魷魚(yú)內(nèi)臟酶解后的水解度平均值為73.58%，與預(yù)測(cè)值的相對(duì)偏差為