載羥基喜樹堿針形納米靶向給藥系統(tǒng)的構建及性能評價.pdf

1、對于影響納米粒子細胞攝取因素的研究，人們已經(jīng)做了非常多的工作，對包括載體材料、粒徑、Zeta電位、表面修飾等在內的諸多因素都做了系統(tǒng)的研究。然而在這些研究工作中，所用的絕大多數(shù)都是球形納米粒子，也就是說人們忽略了形狀對納米粒子細胞攝取的影響。近些年來，非球形納米粒由于其異于球形粒子的優(yōu)異性質，受到越來越多的關注，研究者也開始對非球形的納米粒子的性質進行研究，已有大量實驗證明，粒子的形狀對其細胞攝取有著至關重要的影響，但是它們之間的這種關

2、系還沒有完全闡明。
　　10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptothecin，HCPT)是從我國特有的珙桐科旱蓮屬植物喜樹中分離提純出來的一種吲哚類的生物堿（即喜樹堿）的衍生物，屬純天然廣譜抗癌藥，研究表明喜樹堿及其衍生物可通過作用于DNA拓撲異構酶Ⅰ來抑制DNA復制、轉錄和有絲分裂，從而抑制惡性腫瘤的增殖。在自然界中，10-羥基喜樹堿是以大尺寸棒狀晶體的形式存在，也就是說，其本身就具有成為棒狀納米粒子的潛在可能。

3、>　　本文以PEG-b-PLGA為藥物載體，以10-羥基喜樹堿為模型藥物，采用超聲反溶劑法制備出了縱橫比較大的針狀和棒狀的納米粒，并考察了制備條件對其形貌的影響，然后將兩種粒子與本課題組之前制備的球形10-羥基喜樹堿納米粒子進行對比，考察了它們在體外細胞攝取及細胞毒性的差別，得出結論:針狀納米粒子最容易被細胞攝取。我們又通過改良反溶劑法，制備出了尺寸更小的，同時負載甲氨喋呤和10-羥基喜樹堿的雙載藥納米針，并對其體內和體外性質做了研究，

4、結果如下:
　　(1)采用超聲反溶劑法成功制備出了羥基喜樹堿納米針。進行了制備條件的優(yōu)化實驗。優(yōu)化條件為采用丙酮作為溶劑，投料比為1∶1，超聲功率為200 W，超聲時間為3s，間隙3s，冰浴條件下反復150次。根據(jù)優(yōu)化實驗結果，對優(yōu)化條件下制備的羥基喜樹堿納米針的粒徑、Zeta電位、載藥量、包封率、形貌、HCPT的存在狀態(tài)進行分析。結果表明:羥基喜樹堿納米針為兩端尖，中部略寬，長5μm，寬400 nm的針狀結構，粒徑分布較為均一，

5、分散性較好，動態(tài)光散射分析其平均粒徑為356.7 nm，多分散系數(shù)為0.063，zeta電位為-10.9 mV。羥基喜樹堿納米針的載藥量為55.84％，包封率為90.32％，且緩釋效果良好，在pH=7.4的緩沖溶液中，能夠于400 h內緩慢的釋放藥物。
　　(2)體外細胞攝取及細胞毒性實驗。體外細胞攝取實驗表明，不管是三種癌細胞（HeLa細胞，MG-63細胞和MCF-7細胞）還是正常細胞(MC3T3-E1細胞)，對針狀納米粒子的細

6、胞攝取的速率最快，數(shù)量也最多，而對相同尺寸，相同縱橫比的棒狀納米粒子則要小一些，而對尺寸只有150 nm的球狀納米粒子，其細胞攝取的速率和數(shù)量都是遠遠小于針狀納米粒的。對此可能的原因我們也做了探討，這應該與細胞膜在細胞攝取過程中的運動有關，我們定義了一個角度Φ，代表細胞攝取過程中，包裹納米粒子的細胞膜運動方向的角度，角度越小，越容易被攝取。體外細胞毒性實驗表明，三種納米粒子的細胞毒性也與其細胞攝取情況一樣，都是針狀納米粒子＞棒狀納米粒子

7、＞球狀納米粒子。
　　(3)PEG-b-PLGA-MTX復合物的制備。對載體材料PEG-b-PLGA進行了甲氨喋呤的修飾，通過酯化反應，將甲氨喋呤連接到PEG-b-PLGA上，對其進行了紅外光譜的表征，證明了該聚合物-藥物軛合物的成功合成。然后通過紫外分光光度法，計算出其甲氨喋呤在軛合物中的百分含量。
　　(4)雙載藥納米針的制備。利用丙酮-乙醇混合溶液為溶劑，在小劑量條件下，將上述制備的聚合物-藥物軛合物和10-羥基喜樹堿

8、制備成尺寸更小的雙載藥納米針。并對該納米針進行了性質的表征，結果表明:雙載藥納米針同樣為兩端尖，中部略寬的針狀結構，但其長度約1μm，寬約100 nm，粒徑分布較為均一，分散性較好，動態(tài)光散射分析其平均粒徑為102.6 nm，多分散系數(shù)為0.049，zeta電位為-19.3 mV，其羥基喜樹堿的載藥量為62.56％，包封率為92.43％，甲氨喋呤的載藥量為2.03％。該雙載藥納米針緩釋效果良好，在pH=7.4的緩沖溶液中，能夠于400

9、h內緩慢的釋放兩種藥物。
　　(5)雙載藥納米針的體外及體內性質。結果如下:體外細胞攝取實驗表明，HeLa細胞對雙載藥納米針的細胞攝取的速率和數(shù)量都要遠遠大于相同尺寸相同形貌的無甲氨喋呤修飾的羥基喜樹堿納米針，同時做了葉酸競爭性抑制試驗，表明在葉酸存在條件下，雙載藥納米針的細胞攝取明顯下降，說明雙載藥納米針是通過與葉酸受體的特異性結合介導的特異性吞噬進入細胞的。體外細胞毒性實驗也得出類似結論，即雙載藥納米針的細胞毒性更大?；铙w熒光