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文檔簡介
1、rmh-TNF工程菌經(jīng)全面檢定,確認構(gòu)建正確,目的蛋白占菌體總蛋白的百分含量大于30%,菌種保持穩(wěn)定,完全符合大腸桿菌特征,該菌適用工程菌菌庫。
根據(jù)rmh-TNF的表達,使用單因素法對由rmh-TNF在大腸桿菌中表達時的誘導時機、誘導維持時間、pH值、溶解氧等進行了研究,選擇出較好的發(fā)酵工藝參數(shù),確定最佳誘導時機為OD值0.8-1.0,誘導維持時長為3.5小時,pH值在6.8-7.0,溶解氧維持在大于40%。
根據(jù)
2、rmh-TNF代謝特點,優(yōu)化發(fā)酵補料培養(yǎng)基,利用多因素、多水平正交設(shè)計實驗研究了補料培養(yǎng)基配方中碳源氮源比例對發(fā)酵水平的影響,根據(jù)發(fā)酵結(jié)果得到補料培養(yǎng)基配方:100克胰蛋白胨、50克酵母提取物。
通過對補料工藝的研究,確定了注射用重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子發(fā)酵罐發(fā)酵開始誘導后高溫滅菌的補料培養(yǎng)基以流加的方式對發(fā)酵罐進行補加的新補料工藝。
結(jié)果表明:采用優(yōu)化補料工藝后使 rmh-TNF占菌體干重比例平均保持在255.8 m
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