呋喃唑酮代謝物AOZ酶免疫分析方法研究.pdf

1、呋喃唑酮及其代謝物AOZ具有很強(qiáng)的毒性，易對(duì)人體健康造成危害，許多國(guó)家已將呋喃唑酮列為禁用藥物，且不能在動(dòng)源性食品中檢測(cè)出呋喃唑酮及其代謝物AOZ。目前食品安全事件頻發(fā)，仍有不法商販繼續(xù)使用呋喃唑酮，呋喃唑酮在動(dòng)物體內(nèi)迅速代謝為標(biāo)志物AOZ，因此對(duì)畜禽產(chǎn)品中AOZ準(zhǔn)確檢測(cè)顯得至關(guān)重要。目前AOZ殘留的檢測(cè)多采用儀器分析法，雖然準(zhǔn)確性和靈敏度高，但是一般需要昂貴的大型儀器和專業(yè)技術(shù)人員，且檢測(cè)過程繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)成本高，使其無法滿足對(duì)樣

2、品大量快速篩查。因此，建立一種快速、靈敏的AOZ殘留檢測(cè)技術(shù)具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)建立了AOZ殘留檢測(cè)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和化學(xué)酶免疫法(CLEIA)。
　　首先，要對(duì)AOZ進(jìn)行衍生化，利用對(duì)醛基苯甲酸將AOZ衍生化為半抗原CPAOZ。然后利用活化酯法分別將CPAOZ與卵清蛋白(OVA)和辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)，合成包被原CPAOZ-OVA和酶標(biāo)抗原CPAOZ-HRP。
　　其次，對(duì)包被抗原與抗體稀釋倍數(shù)、封閉

3、液、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間、二抗稀釋倍數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，分別建立了AOZ間接競(jìng)爭(zhēng)CLEIA法和間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。
　　然后，對(duì)包被抗體與酶標(biāo)抗原稀釋倍數(shù)、封閉液、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，分別建立了AOZ的直接競(jìng)爭(zhēng)CLEIA法和直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。
　　最后對(duì)四種方法進(jìn)行方法評(píng)估，結(jié)果表明，間接競(jìng)爭(zhēng)CLEIA法的IC50值為0.74ng/mL，對(duì)牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為84.5％-97.8％，最低檢測(cè)限為0.028ug/kg。直接競(jìng)爭(zhēng)CLE

4、IA法的IC50值為2.45ng/mL，對(duì)牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為83.9％-93.5％，最低檢測(cè)限為0.042ug/kg。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的IC50值為1.096ng/mL，對(duì)牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為87.4％-102.7％，最低檢測(cè)限為0.225ug/kg。直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法的IC50值為2.511ng/mL，對(duì)牛肉、豬肉和雞肉的加標(biāo)回收率為84.5％-104.0％，最低檢測(cè)限為0.253ug/kg。四種方法除了對(duì)