熱脅迫下小金蝠蛾幼蟲(chóng)氧化損傷研究.pdf

1、小金蝠蛾（Thitarodes xiaojinensis）幼蟲(chóng)是我國(guó)名貴中藥冬蟲(chóng)夏草的寄主昆蟲(chóng)，主要生活于青藏高原及其周邊的高海拔、高寒地區(qū)，低溫適應(yīng)性強(qiáng)，但在室溫下（25-27℃）不能正常存活。由于蟲(chóng)草價(jià)格不斷上漲、過(guò)度采挖，導(dǎo)致蟲(chóng)草資源日益緊縮；另外，隨著全球氣候變暖，寄主昆蟲(chóng)的生境溫度改變，這對(duì)蟲(chóng)草資源也造成了一定的影響。本文針對(duì)小金蝠蛾幼蟲(chóng)室溫下不能正常存活這一問(wèn)題，就其生理生化和分子機(jī)制進(jìn)行研究。
　　首先，通過(guò)對(duì)蟲(chóng)體的

2、血淋巴中的氧化損傷標(biāo)志物——丙二醛（Malonalde hyde, MDA）的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)27℃脅迫后，血淋巴中的MDA含量是對(duì)照組的將近2倍，說(shuō)明蟲(chóng)體內(nèi)氧化損傷程度嚴(yán)重，大量的膜脂結(jié)構(gòu)發(fā)生過(guò)氧化，確定了高溫脅迫下氧化損傷的存在。對(duì)血淋巴中保護(hù)酶（超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、過(guò)氧化物酶）進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)只有過(guò)氧化物酶的相對(duì)酶活力升高顯著，但超氧化物歧化酶以及過(guò)氧化氫酶的相對(duì)酶活力均沒(méi)有變化，而在活性氧的清除中，超氧化物歧化酶屬于關(guān)鍵環(huán)節(jié)，

3、可催化超氧陰離子生成過(guò)氧化氫，然后由過(guò)氧化物酶或過(guò)氧化氫酶進(jìn)一步降解過(guò)氧化氫?？梢?jiàn)27℃脅迫后，蟲(chóng)體血淋巴中的保護(hù)酶相對(duì)酶活力整體水平較低，不足以清除過(guò)多的活性氧，導(dǎo)致活性氧在體內(nèi)積累造成氧化損傷。
　　其次，從結(jié)構(gòu)上對(duì)27℃脅迫后的蟲(chóng)體進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其中腸細(xì)胞的線粒體出現(xiàn)腫脹、線粒體膜破裂，線粒體內(nèi)嵴排列混亂，說(shuō)明小金蝠蛾幼蟲(chóng)在27℃脅迫下，線粒體受到了氧化損傷。
　　利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對(duì)血淋巴及脂肪體進(jìn)行了代謝

4、組學(xué)分析，結(jié)果顯示血淋巴與脂肪體中的還原性物質(zhì)，如還原性糖類(lèi)、氨基酸類(lèi)含量顯著下降，其中血淋巴中膽固醇含量顯著性上升，而有研究表明膽固醇與誘導(dǎo)活性氧的生成有一定的關(guān)聯(lián)；通過(guò)對(duì)磷酸戊糖途徑多種物質(zhì)含量變化的分析，得出磷酸戊糖途徑整體代謝水平的變化情況，結(jié)果顯示，在血淋巴中該代謝途徑是增強(qiáng)的，說(shuō)明該途徑為機(jī)體提供了大量的還原力NADPH，而酶活測(cè)定表明NADPH氧化酶活性是顯著性升高的，代謝組數(shù)據(jù)顯示，膽固醇含量顯著升高，膽固醇可誘導(dǎo)NAD