二甲雙胍對肺腺癌細胞系PC9、PC9-GR增殖抑制、凋亡誘導及吉非替尼增敏作用的研究.pdf

1、非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)是我國高發(fā)腫瘤，其發(fā)病率位居男性腫瘤患者的第一位、女性腫瘤患者的第二位。手術、放療、化療是NSCLC的傳統(tǒng)治療手段。近年來，隨著對NSCLC發(fā)病機制研究的深入，表皮生長因子(Epidermal Growth FactorReceptor，EGFR)信號通路在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用不斷被認識?；诖税l(fā)展起來的靶向EGFR信號通路的靶向治療已應用

2、于NSCLC的臨床治療。靶向治療因其治療效果好，副作用相對較小，已成為NSCLC的一種重要治療手段。然而，患者接受一定時間的治療后，幾乎不可避免地出現(xiàn)耐藥，而使治療失效，病情進展。因此，尋找延緩、逆轉靶向治療耐藥的方法是當前靶向治療領域的一個重要問題。
　　二甲雙胍是目前廣泛使用于Ⅱ型糖尿病治療的一種胰島素增敏劑。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍除對Ⅱ型糖尿病的治療作用外，在心血管疾病、多囊卵巢綜合癥及腫瘤的預防和治療中可能發(fā)揮重要作用

3、。二甲雙胍與腫瘤的關系尤其受到重視。越來越多的證據(jù)表明，二甲雙胍可能具有抑制腫瘤增殖，改善腫瘤對化療藥物敏感性的作用。本實驗用二甲雙胍作用于人肺腺癌PC9、PC9/GR細胞，觀察其對不同EGFR突變狀態(tài)的肺腺癌細胞增殖抑制作用，及其對PC9/GR細胞吉非替尼敏感性的影響及其可能機制，為進一步研究提供基礎。
　　第一章：二甲雙胍對肺腺癌PC9、PC9/GR細胞的增殖抑制、凋亡誘導作用
　　研究目的:研究二甲雙胍對人肺腺癌PC9

4、、PC9/GR細胞抑制增殖及誘導凋亡的效應
　　研究方法:以不同濃度二甲雙胍干預PC9、PC9/GR細胞，四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞增殖抑制情況，AnnexinV-FITC/PI雙染流式細胞術檢測細胞凋亡率。
　　結果:
　　1.MTT比色法檢測不同濃度二甲雙胍作用于PC9，PC9/GR細胞，發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的提高、作用時間的延長，藥物對PC9、PC9/GR細胞的增殖抑制作用逐漸增強。且二甲雙胍對PC9的增殖抑

5、制作用與對PC9/GR的增殖抑制作用無明顯差異。
　　2.不同濃度二甲雙胍(1mmol/L、2mmol/L、4mmol/L、8mmol/L、10mmol/L)干預PC9、PC9/GR細胞48h后，PC9細胞凋亡率由9.59％升高至25.94％，PC9/GR細胞凋亡率由7.28％上升至23.93％。各濃度二甲雙胍干預組與對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1、體外實驗證明，在一定濃度范圍內，

6、二甲雙胍對人肺腺癌PC9、PC9/GR細胞株具有抑制增殖作用，其作用具有濃度和時間依賴性。
　　2、二甲雙胍在體外可誘導PC9、PC9/GR發(fā)生凋亡，其作用具有濃度依賴性。
　　第二章：二甲雙胍對肺腺癌PC9/GR細胞株吉非替尼敏感性的影響及其機制
　　研究目的:研究二甲雙胍對PC9/GR細胞吉非替尼敏感性的影響及其可能機制。
　　研究方法:以5μmmol/L吉非替尼聯(lián)合不同濃度二甲雙胍作用于PC9/GR細胞48

7、小時，以MTT法檢測細胞增殖抑制率，判斷不同濃度二甲雙胍對PC9/GR細胞吉非替尼敏感性的影響。流式細胞術分析二甲雙胍、吉非替尼、二甲雙胍+吉非替尼干預PC9/GR細胞后，細胞凋亡率的變化。Western Blot法檢測 AMPK、p-AMPK、m-TOR、p-mTOR等有關蛋白的表達水平。
　　結果:
　　1.MTT法檢測發(fā)現(xiàn)，不同濃度二甲雙胍與吉非替尼聯(lián)用后，均能較單藥吉非替尼更強地抑制細胞增殖。兩藥表現(xiàn)為協(xié)同作用，且較

8、低劑量的二甲雙胍的協(xié)同效應較強。
　　2.流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)，2mmol/L二甲雙胍與5μmol/L吉非替尼聯(lián)用，干預PC9/GR細胞48h后，可較單藥吉非替尼導致更高比例的細胞凋亡，細胞凋亡率從22.29％上升至35.98％，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。兩藥的協(xié)同系數(shù)Q=1.094，表明兩藥在誘導PC9/GR細胞凋亡上具有相加作用。
　　3.Western Blot法檢測示2mmol/L二甲雙胍干預PC9/GR細胞

9、后，引起AMPK、p-AMPK、mTOR表達的上調，p-mTOR表達的下調。5μmol/L吉非替尼干預后，引起AMPK、p-AMPK、mTOR的下調，p-mTOR的上調。而兩藥聯(lián)合作用干預PC9/GR細胞后，引起AMPK、p-AMPK、mTOR表達上調，p-mTOR下調，其表達水平較單獨用藥組有顯著差異(P＜0.05)。
　　結論:
　　一定濃度范圍內，二甲雙胍具有增強PC9/GR細胞對吉非替尼敏感性的作用，其機制可能與二甲