鮑曼不動(dòng)桿菌相關(guān)耐藥機(jī)制的分析.pdf

1、鮑曼不動(dòng)桿菌是醫(yī)院感染的重要條件致病菌之一，在醫(yī)院環(huán)境中可長(zhǎng)期存在，特別是機(jī)體抵抗力低下或免疫功能受損時(shí)更易出現(xiàn)相關(guān)的院內(nèi)感染。近年來(lái)隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，耐碳青酶烯類(lèi)的鮑曼不動(dòng)桿菌日益增多，甚至出現(xiàn)了全耐藥株，給臨床醫(yī)療使用抗感染藥物帶來(lái)了新的挑戰(zhàn)。目前，整合子系統(tǒng)作為細(xì)菌耐藥產(chǎn)生及傳播的重要機(jī)制已經(jīng)得到了許多研究者的關(guān)注，越來(lái)越多的證據(jù)表明其與臨床多重耐藥菌株的產(chǎn)生及流行有著很密切的聯(lián)系。本課題分析鮑曼不動(dòng)桿菌中整合子的存在特

2、點(diǎn)和流行趨勢(shì)，及研究金屬酶對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物耐藥方面的作用機(jī)理，從而為臨床上選擇合理的抗生素提供理論依據(jù)。 本課題采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)室方法分離鑒定由臨床收集的鮑曼不動(dòng)桿菌129株，用MIC和K-B法相結(jié)合的方法對(duì)該菌進(jìn)行藥敏研究，了解細(xì)菌在醫(yī)院中的耐藥特點(diǎn)和分布情況。 設(shè)計(jì)不同的引物用PCR的方法擴(kuò)增整合子及其可變區(qū)，以了解整合子在鮑曼不動(dòng)桿菌中的分布特點(diǎn)及其攜帶的耐藥基因盒的種類(lèi)。129株細(xì)菌中檢測(cè)出1類(lèi)整合子74株（57.4

3、％），未檢出2、3類(lèi)整合子。PCR擴(kuò)增1類(lèi)整合子可變區(qū)，發(fā)現(xiàn)其攜帶的基因盒以2000bp、2500bp、800bp和350bp大小的片段占優(yōu)。對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序分析整合子所攜帶的基因盒類(lèi)型，有五種：dfrⅦ，dfrAl-orfC、aacA4-aadB、dfrAl2-orfF-aadA2、aacA4-catB8-aadA1。 采用雙紙片增效法和協(xié)同法對(duì)耐亞安培南或美羅培南的65株細(xì)菌進(jìn)行金屬酶的表型篩選，共檢出產(chǎn)金屬酶的細(xì)菌18株。

4、設(shè)計(jì)金屬酶基因IMP-1、VIM-2、SIM-1引物對(duì)細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)。PCR擴(kuò)增后檢測(cè)出VIM-2型，未檢出IMP-1和SIM-1型。經(jīng)DNA測(cè)序與網(wǎng)上Genbank序列同源性比較分析證實(shí)為VIM-2型金屬酶。 采用腸桿菌間重復(fù)序列PCR（ERIC-CR）的方法對(duì)65株亞胺培南或美羅培南耐藥的臨床菌株進(jìn)行了基因分型的分析。確定其同源性，為進(jìn)一步了解菌株的耐藥情況在院內(nèi)的流行趨勢(shì)和特點(diǎn)提供依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢出的菌株含有20種不同的基因