香煙煙霧提取物對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)sEPCR和mEPCR的影響及辛伐他汀的干預(yù)作用.pdf

1、研究背景
　　 血管內(nèi)皮的完整和功能的正常對(duì)于維持血流通暢具有重要意義。大量研究資料表明,吸煙可以損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,引發(fā)血栓的形成。近年來(lái),內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(endothelial cell protein C receptor,EPCR)與血栓形成的關(guān)系引起學(xué)術(shù)界的高度重視。當(dāng)各種因素導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí),膜聯(lián)EPCR(membrane associated EPCR,mEPCR)由內(nèi)皮細(xì)胞脫落,致使可溶

2、性EPCR(soluble EPCR,sEPCR)濃度升高,使血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。因此,測(cè)定sEPCR成為反映血栓形成的敏感指標(biāo)之一。辛伐他汀除其調(diào)脂作用之外,還具有內(nèi)皮保護(hù)、抗凝、抑制血小板聚集與抗炎等作用。辛伐他汀是否可以改善香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract,CSE)介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凝血功能障礙,尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 目的：
　　 研究不同條件CSE對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umb

3、ilical vein endothelial cells,HUVECs)表達(dá)可溶性內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)和膜聯(lián)內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(mEPCR)的影響及辛伐他汀的干預(yù)作用。
　　 方法：
　　 采用HUVECs細(xì)胞株進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。
　　 (1)CSE對(duì)HUVECs表達(dá)sEPCR的時(shí)間及濃度依賴性：HUVECs培養(yǎng)后接種于24孔培養(yǎng)板中,隨機(jī)分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組,進(jìn)行以下研究。①CSE作用的濃度依賴性：分別

4、用0％、2.5％、5％及10％的CSE孵育細(xì)胞,8h后收集各組上清液：②CSE作用的時(shí)間依賴性：用5％CSE與細(xì)胞分別孵育0、4、8、12及24h,每組均設(shè)立對(duì)照,收集各組上清液。采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心分析法(ELISA)測(cè)定各組上清液中sEPCR的含量。
　　 (2)辛伐他汀的干預(yù)作用：HUVECs培養(yǎng)后接種于25cm×25cm的培養(yǎng)瓶中,隨機(jī)分為對(duì)照組、5％CSE組、不同濃度辛伐他汀組及辛伐他汀干預(yù)組。對(duì)照組培養(yǎng)液中不加

5、任何干預(yù)；辛伐他汀組分別加入終濃度為50、100、200μmol/L的辛伐他汀液孵育24h,辛伐他汀干預(yù)組先以50、100、200μmol/L的辛伐他汀預(yù)處理細(xì)胞2h,再與5％CSE孵育24h。收集各組的細(xì)胞及上清液,ELISA法檢測(cè)上清液中sEPCR蛋白含量,實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中mEPCRmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)CSE對(duì)HUVECs表達(dá)sEPCR的時(shí)間及濃度依賴性：①HUVECs與不同濃度

6、CSE孵育8h后,5％、10％CSE組與對(duì)照組比較,sEPCR表達(dá)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(均P＜0.05),2.5％CSE組升高與對(duì)照組比較則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),5％、10％CSE兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；②HUVECs與5％CSE組分別孵育0、4、8、12及24h后,不同時(shí)間點(diǎn)5％CSE組sEPCR表達(dá)均高于對(duì)照組,其中8、12、24h組與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05),且呈時(shí)間依賴性。<

7、br>　　 (2)辛伐他汀的干預(yù)作用：①5％CSE組sEPCR蛋白含量高于對(duì)照組,mEPCRmRNA表達(dá)低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)；②100μmol/L與200μmol/L辛伐他汀組sEPCR蛋白含量均高于對(duì)照組,低于5％CSE組,其mEPCRmRNA表達(dá)均低于對(duì)照組,高于5％CSE組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)；③各辛伐他汀干預(yù)組sEPCR蛋白含量均低于5％CSE組,但高于對(duì)照組及相應(yīng)濃度的辛伐他汀組