人脂聯(lián)素基因cDNA克隆及其在肥胖癥患者皮下與大網(wǎng)膜脂肪組織中的表達.pdf

1、第一部分 人脂聯(lián)素基因全長cDNA克隆目的克隆人脂聯(lián)素(adiponectin)基因cDNA,為進一步研究adiponectin的功能提供實驗基礎(chǔ).方法勻漿中國人大網(wǎng)膜脂肪墊、從中提取總RNA,應(yīng)用RT-PCR方法擴增出adiponectin cDNA基因全長.PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳、割膠純化后,亞克隆入載體pMD18-T中,形成重組載體pMD18T-adiponectin.篩選出陽性克隆,通過限制性內(nèi)切酶酶切鑒定后對其進行測序.結(jié)果從脂

2、肪組織總RNA中擴增得到745bp目的片段.重組質(zhì)粒pMD18T-adiponectin被EcoR Ⅰ和Sph Ⅰ內(nèi)切酶切為兩條帶,片段的大小與理論值800bp和2637bp相符.核苷酸序列分析顯示其cDNA序列與Genbank人adiponectin基因序列基本相同,僅在37位氨基酸由Thr(ACA)變成了Ala(GCA),證明已成功克隆adiponectin基因mRNA編碼區(qū).結(jié)論成功地克隆中國人adiponectin基因全長cDN

3、A.為構(gòu)建adiponectin的真核表達載體進一步研究adiponectin功能提供了物質(zhì)基礎(chǔ).第二部分 肥胖癥患者皮下、大網(wǎng)膜脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達的定量研究目的 探討肥胖癥患者大網(wǎng)膜與腹部位下脂肪組織脂聯(lián)素mRNA的表達水平及與體重指數(shù)(BMI)、腰圍、臀圍、腰殿比(WHR)、血脂、胰島素敏感性的相關(guān)關(guān)系.方法 用半定量RT-PCR方法檢測28例非肥胖癥患者和19例肥胖癥患者大網(wǎng)膜與腹部皮下脂肪組織脂聯(lián)素mRNA的表達水平,并

4、測量身高、體重、腰圍、殿圍、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、計算體重指數(shù)(BMI)和腰臀比(WHR).測空腹血糖(FRG)、胰島素(FINS)、血脂,計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR).結(jié)果 (1)肥胖組網(wǎng)膜脂肪組織聯(lián)素mRNA表達水平低于腹部皮下脂肪組織(P<0.05),肥胖組大網(wǎng)膜脂肪組織聯(lián)素mRNA表達較非肥胖組下降(P<0.05).(2)肥胖組血漿TG與VLDL-C(P<0.05)、FINS與HO

5、MA-IR(P<0.01)、SBP與DBP(P<0.01)高于非肥胖組,ISI低于非肥胖組(P<0.01).(3)脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達與各指標(biāo)的偏相關(guān)分析顯示非肥胖組中網(wǎng)膜脂肪組織聯(lián)素mRNA表達量與BMI(r=-0.513,P<0.05)、VLDL-C(r=-0.733,P<0.01)顯著負(fù)相關(guān),與年齡、WHR、血壓、FPG、FINS、ISI、HOMA-IR無顯著相關(guān)性(P>0.05).結(jié)論 肥胖癥患者大網(wǎng)膜脂肪組織聯(lián)素mRNA