組蛋白去乙?；敢种苿δI癌細胞增殖的影響及可能的調節(jié)機制.pdf

1、背景：
　　在泌尿系統(tǒng)腫瘤中，腎細胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是導致死亡的第三大原因，在成年人惡性腫瘤中約占2-3％，盡管現(xiàn)代診療技術不斷提高，但仍有約30%的腎細胞癌患者會發(fā)生轉移。外科手術是治療早期和局部晚期腎細胞癌的主要方法，對于晚期轉移性腎癌患者，以化學治療及放射治療為主，但效果不佳。其治療一直是個棘手的問題，因此迫切需要尋找新的治療方法。
　　組蛋白乙?；?(histone actyl

2、ase, HAT)和組蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase, HDAC）是功能相反的兩種酶，其中HAT的作用是使組蛋白末段乙酰化，舒展核小體結構、激活基因轉錄，而HDAC的功能則為抑制基因轉錄。它們共同調節(jié)組蛋白乙?；钠胶膺M而影響染色體的折疊和基因轉錄，組蛋白乙酰化的失衡與基因沉默、腫瘤惡性病變、細胞生長及細胞信號異常有關。HDAC異常表達是組蛋白乙?；轿蓙y的關鍵因素，并且HDAC異常表達與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關

3、系，抑制HDAC活性被認為是有效的抗腫瘤途徑。
　　目的：
　　體外研究組蛋白去乙?；敢种苿╤istone deacetylase inhibitors，HDACi）曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)和帕比司他（panobinostat, LBH589）對人腎癌細胞株增殖、細胞周期分布及凋亡的影響，并進一步探討其可能的分子機制。
　　方法：
　　用LBH589或TSA作用于人腎癌細胞株OS-R

4、C-2，在設定的時間點用四甲基偶氮唑藍方法（MTT）檢測細胞生長抑制率并檢測出最佳刺激濃度和時間；用流式細胞技術（flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測不同藥物作用前后腎癌細胞周期變化情況及凋亡情況；用蛋白印記技術（western blots）分析不同藥物作用前后腎癌細胞內c-Jun、磷酸化c-Jun（p-c-Jun）、 Bcl-2、Bax蛋白表達變化。用JNK抑制劑SP600125阻斷JNK信號通路后，觀察SP600125預處理+

5、TSA組較TSA單獨處理腎癌細胞周期、凋亡及凋亡相關蛋白的變化情況。
　　結果：
　　TSA和LBH589在體外均可抑制腎癌細胞生長，且具有濃度與時間依賴性；TSA與LBH589最佳刺激濃度分別為1μM、100nM，最佳刺激時間分別為72h、48h；FCM檢測到 TSA或 LBH589組細胞周期發(fā)生變化，與對照組相比，處理組發(fā)生 G2/M期周期阻滯（p<0.05）；與對照組比較，TSA或 LBH589處理組腎癌細胞發(fā)生明顯凋

6、亡（p<0.05）。Western blots顯示TSA和LBH589均能明顯促進p-c-jun蛋白水平表達，同時TSA也能誘導Bax蛋白表達而抑制Bcl2蛋白表達，與對照組相比，有顯著統(tǒng)計學意義（p<0.05）；與TSA單獨處理組相比，JNK抑制劑SP600125預處理+TSA組能部分減弱TSA對腎癌細胞的抑制效應，同時能逆轉TSA誘導的腎癌細胞G2/M期阻滯和細胞凋亡，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　結論：