RNA干擾Survivin及neu基因對卵巢癌細胞株SKOV3-DDP細胞生長、凋亡及藥物敏感性的作用.pdf

1、　　目的：RNA干擾(RNAi)是由雙鏈RNA介導的、在mRNA水平特異關閉相應基因的基因阻斷新技術，在基因功能的研究方面已經(jīng)展現(xiàn)顯著功效，對于基因治療亦具有極大的應用前景。Survivin及neu基因與卵巢癌細胞的生長、凋亡及耐藥性相關。本研究旨在探討Survivin及HER-2/neuRNAi對卵巢癌耐藥細胞株SKOV3/DDP細胞生長、凋亡及藥物敏感性的作用，尋找下調基因表達并逆轉化療耐藥的方法，為卵巢癌的基因治療探索新途徑。

2、 方法：應用含有U6啟動子的pSilencer1.0-U6表達載體構建Survivin及neu基因的小干擾RNA(siRNA)表達載體(pSilencer-Survivin和pSilencerneu)，用脂質體方法將pSilencer-Survivin或pSilencer-neu轉染卵巢癌順鉑耐藥細胞株SKOV3/DDP，另設未轉染組及轉染pSilencer-control組為對照。顯微鏡下觀察轉染前后細胞的變化；用RT-PCR及W

3、esternBlot檢測Survivin及neu基因mRNA及蛋白的表達；MTT法檢測細胞生長情況；流式細胞儀檢測細胞凋亡及周期的變化；加入順鉑后檢測RNAi對SKOV3/DDP順鉑藥物敏感性的影響?！　〗Y論：應用RNAi可以部分阻抑Survivin及HER-2/neu基因在卵巢癌順鉑耐藥細胞株SKOV3/DDP中的表達，使SKOV3/DDP細胞生長減慢、凋亡增加，而且對順鉑的敏感性增強。RNAi技術有望成為腫瘤基因治療的一種新方法。