肝素前體多糖的分離純化研究.pdf

1、肝素前體多糖是脊椎動物在催化合成肝素的過程中產生的前體物質，該物質經過一系列的硫酸化及異構化修飾后即可合成肝素。本研究以E.Coli K5發(fā)酵液為原料，對肝素前體多糖的提取除雜、分離純化、檢測以及結構鑒定進行了研究。研究結果如下:
　　1.采用有機溶劑沉淀的方法，經過提取得到的肝素前體多糖粗品為淡黃色粉末物質，其糖醛酸含量為23.9％;對提取的粗多糖進行了除雜工藝研究，優(yōu)化了雙氧水氧化法脫色和Sevage法除蛋白的工藝條件。經綜合

2、考慮雙氧水氧化法脫色的最佳條件為:雙氧水濃度為1.5％，溫度為25℃，時間為3h，多糖的脫色率為67.35％;Sevage法除蛋白的最佳工藝條件為氯仿:正丁醇(V/V)為4∶1，樣品:試劑（W/W）為1∶1，萃取時間10min，萃取次數為3次，在此條件下多糖的除蛋白率為76.59％。
　　2.研究了乙醇沉淀法對多糖純化效果的影響。結果表明，當heparosan多糖濃度為14％(W/V)、Nacl濃度為3％(W/V)、乙醇濃度為70

3、％(V/V)，重復沉淀4次時，純化物中的葡萄糖醛酸含量可達44.52％(W/W)，多糖的得率為43.50％（W/W）。
　　3.研究了殼聚糖沉淀法對多糖純化效果的影響。當殼聚糖用量為4.0mg時，得到沉淀的多糖回收率為94％(W/W)。沉淀繼續(xù)純化得到多糖純品，其糖醛酸含量為45.69％，得率為40.36％。
　　4.研究了DEAE Sepharose fast flow離子交換法對多糖純化效果的影響。經過該法純化的多糖其糖

4、醛酸含量為49.35％，得率為38.52％。
　　5.對多糖的糖醛酸含量、純度、分子量和理化性質進行了檢測和鑒定。硫酸-咔唑法測糖醛酸含量的最優(yōu)條件是:水解溫度為25℃、硼砂-硫酸用量為4mL、水解時間為20min、咔唑-乙醇用量為0.15mL、顯色時間為10min。通過重現性實驗、穩(wěn)定性實驗以及回收率實驗證明了這一方法的可靠和準確。采用高壓凝膠滲透色譜法(HPGPC)對多糖的純度和分子量進行了鑒定，結果表明離子交換法得到的多糖純