水通道蛋白在氧化性白內(nèi)障的表達變化及意義.pdf

1、目的：觀察0型及Ⅰ型水通道蛋白(AQP0和AQP1)在正常及H2O2誘發(fā)的氧化性白內(nèi)障模型大鼠晶狀體上的表達，探討其在氧化性白內(nèi)障發(fā)生過程中所發(fā)揮的作用。 方法：將健康清潔級Wistar大鼠78只離體透明晶狀體隨機均分為2組，實驗組加含2mmol/LH2O2的培養(yǎng)液(即含10％血清的MEM)，對照組不加H2O2，其余處理同實驗組。每組按不同時間點(12、24、48h)共設(shè)3個亞組，每個亞組13只晶狀體。在相應時間點分別觀察兩組大

2、鼠晶狀體的混濁情況；運用免疫組織化學方法(SP法)對AQP1在大鼠晶狀體上的表達進行定位檢測，并采用HPIAS-1000型醫(yī)學彩色圖像分析系統(tǒng)半定量檢測AQP1的表達；運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)及計算機圖像分析技術(shù)檢測AQP0和AQP1分別在兩組大鼠晶狀體上的表達變化；應用SPSS¨.5統(tǒng)計軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，采用IndependentSamplesT-Test法和One-Way-ANOVA法分別對計量資料進行獨立樣本

3、T檢驗和單因素方差分析，并使用SNK法和LSD法進行組間比較。 結(jié)果：加入培養(yǎng)液后48h內(nèi)，對照組晶狀體仍保持透明，而實驗組的晶狀體有不同程度的混濁；免疫組織化學和計算機圖像分析結(jié)果顯示：AQP1在大鼠晶狀體上陽性表達的部位位于晶狀體前囊膜的晶體上皮細胞(lensepithelialcells，LECs)的胞膜，胞膜上可見程度不等的棕黃色顆粒。各亞組均可見到其陽性表達，各時間點實驗組晶狀體上的AQP1表達均較對照組不同程度減少，

4、差異有顯著性意義(P＜0.05)。各時間點實驗組AQP1的表達隨H2O2作用時間的延長而減少，組內(nèi)差異性顯著(P＜0.05)；RT-PCR和計算機圖像分析結(jié)果顯示：在mRNA水平，AQP0和AQP1在大鼠晶狀體廣泛表達，實驗組和對照組的晶狀體進行RT-PCR均可獲得AQP0和AQP1的陽性目的基因，不同時間點實驗組晶狀體的AQP0和AQP1的表達均較對照組有不同程度的減少，而且隨著H2O2作用時間延長，各亞組之間AQP0和AQP1的表達