肺炎克雷伯菌耐藥突變選擇窗的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：
　　 體外測定氟喹諾酮類藥物左氧氟沙星對臨床分離肺炎克雷伯菌的最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和防突變濃度(Mutant Prevention
　　 Concentration,MPC)。建立小鼠肺部肺炎克雷伯菌感染模型,測定相關(guān)藥代/藥效動力學(xué)(PK/PD)參數(shù),觀察藥物濃度對耐藥突變菌株富集程度的影響,結(jié)合體外實驗測定結(jié)果,在動物體內(nèi)初步驗證突變選擇窗(

2、MSW)理論,并通過MSW理論與已有的藥代動力學(xué)參數(shù),對臨床左氧氟沙星治療肺炎克雷伯菌肺炎的給藥策略進行評價。
　　 方法
　　 采用CLSI規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)瓊脂平皿二倍稀釋法,測定氟喹諾酮藥物左氧氟沙星對臨床分離肺炎克雷伯菌的MIC和MPC,計算選擇指數(shù)(SI),選擇銅綠假單胞菌ATCC27853作為質(zhì)控菌株；鼻腔滴注法建立小鼠肺部肺炎克雷伯菌感染模型,比較不同接種劑量組死亡情況,確定最佳造模劑量；根據(jù)最終確定造模劑量建立小

3、鼠肺部肺炎克雷伯菌感染模型,通過灌胃方法分別給予15mg/kg、30 mg/kg、60mg/kg和90 mg/kg左氧氟沙星治療,考察不同劑量組耐藥突變株的出現(xiàn)頻率及治療后MIC變化情況,評價不同劑量組與細菌耐藥突變株富集擴增的關(guān)系；采用高效液相色譜法(HPLC)測定模型組小鼠治療一天、三天、五天、七天后的左氧氟沙星血藥濃度,參考相關(guān)PK/PD常數(shù),結(jié)合體外測定MPC和MSW值評價臨床應(yīng)用左氧氟沙星治療細菌性感染的劑量與療效關(guān)系。

4、>　　 結(jié)果
　　 體外測定臨床分離肺炎克雷伯菌的MIC和MPC分別為0.0625μg/ml和1μg/ml,SI=16,根據(jù)CLSI藥敏標(biāo)準(zhǔn),此菌株為對左氧氟沙星敏感菌株；三個接種劑量組死亡率無明顯差異,綜合考慮接種時間、接種劑量等方面因素,確定最終接種濃度為108CFU/ml,接種劑量為30μl；給予不同劑量左氧氟沙星治療過程中,15 mg/kg劑量組和90mg/kg劑量組,突變率較恒定,無明顯升高,MIC值多無變化,而30

5、mg/kg和60mg/kg劑量組突變率明顯升高,MIC值升高的動物數(shù)明顯增多,30mg/kg主要選擇低水平突變,MIC值較接種時升高2倍,而60mg/kg劑量組則主要選擇高水平突變,MIC值較接種時升高8倍；HPLC測定結(jié)果表明,在治療期間內(nèi),血藥濃度位于MSW內(nèi)的時間越長,細菌的突變率越高。
　　 結(jié)論
　　 不同劑量左氧氟沙星治療肺炎克雷伯菌感染的細菌突變率不同,不適當(dāng)劑量的藥物雖可以達到治療目的,卻會引起細菌突變株