高氧對新生大鼠肺血管發(fā)育及肺組織Sonic hedgehog信號通路的影響.pdf

1、目的：支氣管肺發(fā)育不良（BPD）是早產兒中最常見的一種慢性肺部疾病。重癥BPD 患兒的死亡率可達30％-40％，存活者常有慢性肺功能與氣體交換異常，嚴重影響患兒生長發(fā)育及生活質量。BPD 的發(fā)病機制至今尚未完全明了，目前認為早產和高氧是造成BPD 的兩個重要因素。傳統(tǒng)BPD 的病理表現(xiàn)為肺不張與肺充氣過度交替存在，嚴重的氣管上皮損傷、明顯的血管高壓性損傷，肺泡數量減少，氣管平滑肌增生，纖維過度增生等。近年來，由于產前糖皮質激素和生后表面

2、活性物質的應用、輔助通氣技術的改進以及早產兒的營養(yǎng)支持，BPD 的病理特點發(fā)生了新的變化?！靶滦虰PD”以肺泡和肺毛細血管發(fā)育成熟障礙為特征。以往認為肺氣道發(fā)育可決定肺血管發(fā)育方向，但是越來越多的證據表明肺血管并非僅沿氣道被動伸展發(fā)育，肺血管的形成和成熟對肺泡發(fā)育及生后肺泡結構的維持都有重要的作用，肺血管發(fā)育成熟受阻可能在BPD 發(fā)病機制中占據重要位置。Sonichedgehog（Shh）信號通路是調節(jié)胚胎發(fā)育的基本信號通路之一。有研究

3、表明Shh信號通路在促進血管生成方面也發(fā)揮著重要的作用。目前認為Shh 信號通路可通過直接作用于內皮祖細胞（EPC），促進其增殖、遷移、分化形成血管腔，以及上調一些促血管生成因子的表達這兩條途徑來促進血管生成。血管生成素-1（Ang-1）是Shh 信號通路的下游因子之一。Ang-1是內皮細胞特異性的促血管生成因子，主要由血管內皮旁細胞分泌，在血管生成后期的血管的重建及內皮細胞和支持細胞的相互作用中發(fā)揮調節(jié)作用。本研究采用經典的85％高氧

4、持續(xù)吸入肺損傷模型，觀察新生大鼠高氧暴露后，肺血管發(fā)育情況及肺組織中Shh 信號通路及Ang-1表達的變化，旨在探討新生大鼠高氧暴露導致的肺損傷中肺血管發(fā)育受阻的機制及Shh 信號通路可能發(fā)揮的作用。
　　 方法：新生SD 大鼠隨機分為高氧組和空氣組，高氧組生后6h 內開始持續(xù)吸入85％氧氣。生后3、7、14天每組各隨機取8只，肺組織切片行HE 染色，進行肺組織形態(tài)學分析及輻射狀肺泡計數（RAC）；通過肺動脈鋇劑造影及肺動脈密度

5、檢測來評價肺血管的發(fā)育；采用免疫組化技術檢測兩組大鼠肺組織內CD31含量的表達；研究高氧暴露對新生大鼠肺組織Shh 通路中Shh、Ptch-1、Ang-1因子等表達的影響，采用RT-PCR 和Western blot 技術檢測肺組織Shh 通路和Ang-1的mRNA和蛋白水平。
　　 結果：⑴新生大鼠高氧暴露14天后，肺組織的病理表現(xiàn)與早產兒支氣管肺發(fā)育不良（BPD）的病理表現(xiàn)相似。⑵高氧組RAC 值在7d 和14d 時均顯著低

6、于空氣組（10.55±0.13和11.74±0.19，12.47±0.05和15.03±0.16，P<0.05）。⑶肺動脈鋇劑造影顯示，高氧暴露14天后，大鼠肺動脈主干直徑小，肺小動脈顯影明顯減少。高氧組肺動脈密度在14d 時顯著低于空氣組（3.55±0.09和6.03±0.16，P<0.05）。⑷高氧暴露7d 和14d，高氧組肺組織Shh、Ang-1mRNA 和蛋白水平均顯著低于空氣組（P<0.05）。Ptch-1mRNA 和蛋白水平