TLR-4介導(dǎo)抵抗素調(diào)節(jié)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞纖溶因子PAI-1、t-PA的表達(dá).pdf

1、背景：
　　血栓性疾病嚴(yán)重威脅人類的生命健康，其發(fā)病率高居各類疾病之首，且近年來還有漸增之勢(shì)，是當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。抵抗素（resistin）作為一種新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，與以中心性肥胖、胰島素抵抗為主要特征的代謝綜合征（metabolic syndrome, MetS）及心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。Toll樣受體-4（toll like receptor-4, TLR-4）作為機(jī)體天然免疫的受體，參與眾多心血管疾病的發(fā)

2、生發(fā)展。纖溶活性調(diào)節(jié)物質(zhì)，組織型纖溶酶原激活物（tissue plasminogen aetivator, t-PA）及纖溶酶原激活物抑制物-1（plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）在血栓的形成過程中發(fā)揮重要的作用。本課題組前期研究表明，抵抗素可作用于體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)導(dǎo)致PAI-1、t-P

3、A這對(duì)纖溶因子表達(dá)失衡，從而抑制纖溶系統(tǒng)，但其作用受體尚不明確。據(jù)最新研究發(fā)現(xiàn)，抵抗素可與炎癥刺激物脂多糖（1ipopoysaccharide, LPS）競爭TLR-4調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)。然而抵抗素、TLR-4與PAI-1、t-PA這對(duì)纖溶因子的作用關(guān)系目前尚未見報(bào)道。
　　目的：
　　體外培養(yǎng)HUVECs，觀察用Toll樣受體-4抗體(antibody to TLR-4, AbTLR-4)阻滯TLR-4后，是否能減弱抵抗素

4、所引起的纖溶因子PAI-1、t-PA蛋白和mRNA水平的變化，進(jìn)一步探索抵抗素在HUVECs的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而揭示血栓性疾病發(fā)生、發(fā)展的新機(jī)制，為血栓性疾病的防治提供新的理論依據(jù)和思路。
　　方法：
　　1.培養(yǎng)3-5代HUVECs，將其分為單純培養(yǎng)基對(duì)照（control）組，resistin（50ng/ml）組， AbTLR-4（1ug/ml）組，resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）組，培養(yǎng)

5、48h后，酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）法檢測(cè)各組上清液中PAI-1和t-PA蛋白水平。
　　2.培養(yǎng)3-5代HUVECs，將其分為單純培養(yǎng)基對(duì)照組（control），resistin（50ng/ml）組， AbTLR-4（1ug/ml）組，resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）組，培養(yǎng)48h后，實(shí)時(shí)反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（real-time

6、 reverse transcription polymerase chain reaction, real-time RT-PCR）法檢測(cè)各組總RNA中PAI-1和t-PA mRNA水平。
　　結(jié)果：
　　1. resistin（50ng/ml）組較control組PAI-1蛋白水平顯著升高（P<0.05），t-PA蛋白水平無顯著變化；
　　2. resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）組較

7、 resistin（50ng/ml）組 PAI-1蛋白水平顯著下降（P<0.01），t-PA蛋白水平無顯著變化；
　　3. resistin（50ng/ml）組較control組PAI-1 mRNA水平顯著升高(P<0.05)，t-PA mRNA水平無顯著變化；
　　4. resistin resistin（50ng/ml）+AbTLR-4（1ug/ml）組較resistin（50ng/ml）組PAI-1 mRNA水平下降（