Exendin-4對IL-1β誘導胰島β細胞凋亡的保護作用及相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的：探討GLP-1受體激動劑Exendin-4對細胞因子IL-1β誘導的小鼠胰島β細胞株MIN6細胞凋亡的保護作用及其可能的機制。
　　方法：體外培養(yǎng)小鼠胰島β細胞株MIN6細胞，用不同濃度（5-40ng/ml）IL-1β作用24小時，通過噻唑蘭還原（MTT）法觀察不同濃度IL-1β作用后各實驗組細胞的增殖率；用Hoechst-PI熒光染色法觀測各組細胞凋亡形態(tài)， Annexin-Ⅴ-PI染色流式細胞技術(shù)測定各組細胞凋亡率，用G

2、riess法檢測各實驗組細胞內(nèi)一氧化氮（NO）水平，Western Blot方法測定誘導型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白及核因子-κB片段p65（NF-κB p65）蛋白表達水平。之后，應用抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸（NAC）、NF-κB抑制劑四氫化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）及iNOS抑制劑左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）預處理并檢測以上各項指標；隨后用Exendin-4（100nmol/L）預處理細胞，觀察Exendin-4對IL

3、-1β誘導的MIN6細胞凋亡的保護作用，并深入探討Exendin-4對IL-1β誘導MIN6細胞凋亡的保護作用是否通過抑制NF-κB-iNOS-NO信號通路而實現(xiàn)。
　　結(jié)果：MTT顯示IL-1β（5-40ng/ml）作用24小時后，MIN6細胞的增殖率明顯下降，并呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；Hoechst-PI染色熒光顯微鏡及Annexin-Ⅴ-PI雙染流式細胞檢測證實隨著IL-1β濃度的增高，MIN6細胞的凋亡率亦增加；Grisee法

4、檢測結(jié)果顯示不同濃度的IL-1β處理24小時后，隨著IL-1β濃度的增加，細胞NO水平明顯增高；Western Blot檢測結(jié)果顯示不同濃度的IL-1β處理24小時后，隨著IL-1β濃度的增加，胞漿iNOS蛋白及胞核NF-κB p65蛋白表達增多，而胞漿NF-κB p65蛋白表達變化不明顯；iNOS抑制劑L-NAME（500umol/L）、NF-κB抑制劑PDTC（100umol/L）或抗氧化劑NAC（10mmol/L）預處理均可明顯抑

5、制IL-1β誘導的β細胞凋亡及NO水平的增高。Exendin-4預先處理24小時后可以抑制IL-1β誘導的β細胞凋亡及NO水平的增高，下調(diào)胞核NF-κB p65及胞漿iNOS蛋白的表達水平。
　　結(jié)論：（1）IL-1β可誘導MIN6細胞凋亡并增加細胞內(nèi)NO水平；（2）IL-1β能激活NF-κB，上調(diào)iNOS的表達；（3）GLP-1受體激動劑Exendin-4可以顯著抑制IL-1β誘導MIN6細胞的凋亡，提示Exendin-4對IL