小尾寒羊三個(gè)慢型骨骼肌肌鈣蛋白的基因克隆、結(jié)構(gòu)特征及組織表達(dá)分析.pdf

1、慢型骨骼肌肌鈣蛋白基因主要包括肌鈣蛋白C1基因（Troponin C type1，TNNC1）、肌鈣蛋白I1基因（Troponin I type1，TNNI1）和肌鈣蛋白T1基因（Troponin T type1，TNNT1），它們對(duì)骨骼肌的收縮、骨骼肌肌肉纖維特性及多種疾病的發(fā)生有密切關(guān)系。目前，有關(guān)綿羊的TNNC1、TNNI1和TNNT1基因的全長(zhǎng)核酸序列未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)采用RT-PCR、RACE、生物信息學(xué)分析、熒光定量 PCR等

2、技術(shù)方法，克隆了小尾寒羊TNNC1、TNNI1和TNNT1基因的全長(zhǎng)序列，預(yù)測(cè)分析了其對(duì)應(yīng)蛋白的序列和特性，構(gòu)建了其在小尾寒羊和杜泊羊多種組織的表達(dá)譜，從分子水平上探索了小尾寒羊三個(gè)基因的主要結(jié)構(gòu)和表達(dá)特性。主要結(jié)果如下：
　　(1)克隆測(cè)序得到了小尾寒羊TNNC1、TNNI1和TNNT1基因的cDNA序列，其中TNNI1包含兩個(gè)5′端有區(qū)別的序列，并分別命名為TNNI1a和TNNI1b。得到的TNNC1、TNNI1a和TNNT1

3、基因的全長(zhǎng)cDNA序列及TNNI1b基因的部分cDNA序列已提交至GenBank，并分別獲得登錄號(hào)為KR153938、KT218688、KT218689及KT218690。相應(yīng)的編碼氨基酸長(zhǎng)度分別為161、187、194和263個(gè)氨基酸。
　　(2)cTnC蛋白為偏酸性蛋白，且結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，親水性比較好，流動(dòng)性比較大；ssTnI蛋白兩種亞型均為偏堿性蛋白，且結(jié)構(gòu)相對(duì)不穩(wěn)定，親水性比較好；ssTnT蛋白為偏酸性蛋白，流動(dòng)性一般，結(jié)構(gòu)

4、不是很穩(wěn)定，但親水性比較好，流動(dòng)性比較大。cTnC、ssTnI和ssTnT蛋白均沒(méi)有跨膜結(jié)構(gòu)域，含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，無(wú)任何 N-糖基化位點(diǎn)，預(yù)測(cè)為非分泌性蛋白質(zhì)。二級(jí)結(jié)構(gòu)主要以α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲為主。
　　(3)多物種氨基酸序列比對(duì)結(jié)果顯示：cTnC蛋白的氨基酸序列在本試驗(yàn)分析的物種中高度保守。ssTnI兩亞型蛋白和ssTnT蛋白的氨基酸序列均與試驗(yàn)中其它哺乳動(dòng)物的保守性比較高，而與試驗(yàn)中其它的非哺乳動(dòng)物的保守性相對(duì)較差。系統(tǒng)進(jìn)

5、化樹結(jié)果顯示：綿羊的cTnC蛋白最先與野豬、家牛和山羊聚到一類；綿羊的ssTnI蛋白最先與山羊和家牛聚到一類；綿羊的ssTnT蛋白最先與野豬和家牛聚到一類。上述結(jié)果表明小尾寒羊中的cTnC、ssTnI和ssTnT蛋白均與試驗(yàn)中的其它哺乳動(dòng)物的關(guān)系比較近。
　　(4)TNNC1、TNNI1和TNNT1基因在小尾寒羊和杜泊羊的多種組織中的表達(dá)情況不同，然而，這幾個(gè)基因的表達(dá)模式卻存在一定的共性。TNNC1、TNNI1和TNNT1基因均

6、在肋間肌、股二頭肌和背最長(zhǎng)肌中高表達(dá)，且其表達(dá)量均為肋間肌>股二頭肌>背最長(zhǎng)肌。小尾寒羊和杜泊羊中TNNI1a基因在每個(gè)組織中的表達(dá)量都高于TNNI1b基因在各組織中的表達(dá)量。此外，TNNC1、TNNI1和TNNT1基因在小尾寒羊和杜泊羊兩品種羊中的表達(dá)量也存在明顯的區(qū)別。特別的，TNNI1a在小尾寒羊肋間肌中的表達(dá)量顯著高于其在杜泊羊中的表達(dá)量(p<0.05)。三個(gè)基因?qū)?yīng)的蛋白均在背最長(zhǎng)肌、肋間肌、股二頭肌中存在表達(dá)，此外，在兩品種