矮牽牛重瓣花發(fā)育相關基因的分離和表達研究.pdf

1、在觀賞植物中，重瓣性是很重要的一類觀賞性狀，研究此性狀分子形成機理對提高植物的觀賞性有很大意義。矮牽牛是近些年研究花發(fā)育的模式植物，因其具有自然的重瓣品種，對于研究重瓣性狀是一種比較理想的實驗材料。關于重瓣花形成機制的論述大多在于C類基因的突變而引起的雄蕊瓣化和花分生組織的終止程序推遲方面。重瓣矮牽牛是矮牽牛的一種自然突變體，具有很高的觀賞價值，因此，研究它的花形態(tài)建成的相關調控機制絡，即有利于商業(yè)重瓣品種的培育，還可以為雄性不育系的構

2、建提供指導，并且能進一步地豐富花發(fā)育的相關理論。CRISPR-Cas系統(tǒng)作為一種新興的基因定點編輯技術逐漸成熟并在多個植物中成功得到應用，利用此技術能夠對目的基因進行靶向的敲除或敲入。該技術的應用對研究重瓣花形成具體作用機制有很大意義。
　　為研究重瓣花形成的相關作用機制，本試驗以矮牽牛為研究材料，根據(jù)花發(fā)育ABCDE模型的理論基礎，選取A類基因中的PhAP2A，PhWUS基因，C類基因PMADS3、FBP6，生長素類PhARF3

3、基因進行差異表達分析。分離了矮牽牛的PMADS3、FBP6兩個基因，利用CRISPR-Cas9植物基因編輯系統(tǒng)構建敲除單瓣矮牽牛PMADS3、FBP6基因的載體對矮牽?；蚪M進行編輯。主要研究結果如下：
　　通過 RT-PCR得到 PhAP2A，PhWUS，PMADS3，PhARF3幾個基因的差異表達結果；克隆分離出PMADS3、FBP6兩基因的部分基因組序列；成功構建敲除單瓣矮牽牛PMADS3、FBP6基因的載體，并通過農桿菌介